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NPPB对心室肌细胞容积敏感性氯通道的影响
目的观察氯通道阻断剂对小鼠心室肌容积敏感性氯通道的影响.方法采用急性分离的小鼠心室肌细胞,低渗溶液激活容积敏感性氯通道电流,膜片钳全细胞记录法记录电流.结果低渗溶液激活了一个明显的容积敏感性氯通道电流,该电流具有明显的外向整流特征,能被5-硝基-2(3-苯丙胺)-苯甲酸可逆性明显抑制,对内外向电流的抑制率几乎相等[(79.1±2.5)%比(77.1±2.2)%].结论小鼠心室肌细胞容积敏感性氯通道电流具有外向整流性及时间依赖性失活特性,能被氯通道阻断剂所抑制,且该抑制作用具有一定的电压依赖性.
关键词： 容积敏感性氯通道 心室肌 5-硝基-2(3-苯丙胺)-苯甲酸 -
NPPB 在大鼠肝细胞分离中的应用效果及其机制
目的：观察5-硝基-2（3-苯丙胺）-苯甲酸（ NPPB）在大鼠肝细胞分离中的应用效果，并探讨其可能的机制。方法将12只SD大鼠随机分为观察组和对照组各6只。两组分离肝细胞后，采用改良的四步胶原酶分离技术进行消化，制备肝细胞悬液。观察组在使用灌注液进行消化的过程中加入NPPB。采用血细胞计数板计算肝细胞收获量，PAS染色后计算纯度，0．4％台盼蓝染色后计算成活率。细胞无血清培养24 h后，采用全自动生化分析仪检测上层清液中的白蛋白（ ALB）、ALT。采用紫外线分光光度法检测LDH吸光度，并计算LDH释放率。采用RT-PCR法检测细胞线粒体氯通道蛋白4（ CLIC4） mRNA 表达， Western blotting 法检测细胞 CLIC4蛋白表达。结果观察组与对照组肝细胞收获量分别为（4．41±0．20）×108、（4．40±0．26）×108个，纯度分别为90％±1％、89％±2％，成活率分别为88％±2％、85％±1％；两组比较，P均＞0．05。观察组与对照组ALB分别为（43．8±5．0）、（25．2±3．0）g／L，ALT分别为（47．8±6．0）、（104．3±11．7）U／L，LDH释放率分别为21．0％±2．7％、34．0％±2．4％；两组比较，P均＜0．05。观察组与对照组CLIC4 mRNA相对表达量分别为1．01±0．02、1．62±0．01，CLIC4蛋白相对表达量分别为0．38±0．02、0．52±0．03；两组比较，P均＜0．05。结论肝细胞分离过程中应用NPPB可以在不影响分离细胞收获量、纯度及成活率的情况下，减轻肝细胞膜结构和功能损伤，其机制可能与抑制CLIC4表达有关。
