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大鼠脑缺血后神经元中PYK2及 p38MAPK的活化及其意义
目的观察大鼠局部脑缺血后缺血区神经元中PYK2及 p38MAPK的表达并探讨其意义.方法建立大鼠局部脑缺血模型,在缺血后15、30和60min时处死大鼠,采用免疫组化方法观察大鼠缺血区神经元中PYK2及p38MAPK的表达变化.结果正常大鼠皮层仅有微量活化型PYK2和活化型p38MAPK表达.缺血15min后,皮层神经元可见活化型PYK2强免疫阳性标记,这些有活化型PYK2表达的神经元亦呈p38MAPK免疫阳性.缺血区神经元中活化型PYK2和活化型p38MAPK免疫标记在缺血30min时达到强,60min时开始减退.结论缺血可以诱发神经元中PYK2活化,既而通过p38MAPK信号转导通路介导神经元对缺血的应急反应.
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代谢综合征大鼠肥胖特征及ERK1/2和p38MAPK的作用研究
目的 探讨ERK1/2和p38MAPK在脂肪组织生长中的作用.方法 Wistar雄性大鼠20只,随机均分为代谢综合征组和正常对照组,观察代谢综合征大鼠的代谢指标及体重、内脏脂肪含量、脂肪细胞大小和组织病理学改变,Western blot法检测ERK1/2及p38MAPK蛋白在脂肪组织中的表达情况.结果 代谢综合征大鼠血压、血浆游离脂肪酸、甘油三酯、空腹血糖及胰岛素均显著高于对照组( P＜0.01),其体重、腹围、内脏脂肪含量、脂肪系数和各部位脂肪细胞大小亦比对照组显著增高( P＜0.01),肝细胞存在脂肪变性.在棕色脂肪组织中ERK1/2蛋白的表达与对照组比较无显著性差异,皮下脂肪和内脏脂肪中ERK1/2蛋白的表达均显著高于对照组( P＜0.01),而p38MAPK蛋白的表达在所有脂肪组织中均显著高于对照组( P＜0.01).结论代谢综合征大鼠肥胖特征为腹型肥胖,脂肪组织生长以肥大性增生为主,并存在脂质异位沉着(脂肪肝).代谢综合征大鼠脂肪组织增生可能与ERK1/2和p38MAPK信号通路激活有关.
关键词： 代谢综合征 肥胖症 有丝分裂素激活蛋白激酶类 p38 MAP激酶 -
没食子酸丙酯对脑缺血大鼠神经元SAPK/JNK及p38MAPK激活的抑制作用
目的探讨没食子酸丙酯对大鼠脑缺血再灌注模型缺血区周边组织神经元损伤的保护作用及其可能机制.方法通过Nissl和TUNEL染色法检测阳性神经元数量,蛋白免疫印迹、免疫组化法观察活化型Caspase-3,SAPK/州K,p38MAPK及其磷酸化组分的表达.结果没食子酸丙酯干预后,SAPK/JNK,p-SAPK/JNK(1 h),p38MAPK,p-p38MAPK(6 h)及活化型Caspase-3(12 h)表达均减弱,TUNEL阳性神经元减少(24 h),Nissl阳性神经元增多(24 h),神经元凋亡率明显降低.结论没食子酸丙酯保护缺血再灌注后神经元损伤的机制可能与抑制SAPK/JNK及p38MAPK的激活有关.
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p38 MAP激酶在山冈橐吾碱肝细胞毒性中的作用
目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAP 激酶 )在山冈橐吾碱肝细胞毒性中的作用.方法 采用Western杂交方法观察山冈橐吾碱(100 μmol·L-1,分别作用1,5,15,30及60 min)对p38MAP激酶激活的影响;10 μmol·L-1 p38MAP激酶抑制剂SKF86002 预处理15 min后,分别观察其对山冈橐吾碱(100 μmol·L-1)诱导p38MAP激酶磷酸化(30 min,Western杂交法)及细胞毒性(MTT法,36及48 h;台盼蓝染色法,36 h)的影响.结果 Western blot结果显示,100 μmol·L-1山冈橐吾碱明显诱导p38 MAP激酶的磷酸化激活,5～30 min时处于较高水平;SKF86002预处理可以明显抑制山冈橐吾碱诱导的p38 MAP激酶磷酸化;MTT染色法和台盼蓝染色实验均发现SKF86002预处理能部分降低山冈橐吾碱诱导的肝细胞毒性[MTT,36 h: (0.210±0.008) vs (0.170±0.003),48 h: (0.33±0.03) vs (0.200±0.003);台盼蓝染色(80±2)% vs (72±7)%;n=8,P＜0.05].结论 p38MAP激酶可能参与了山冈橐吾碱诱导的肝细胞毒性作用.
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MAP激酶家族在淀粉样β蛋白片段25～35引起的大鼠海马炎症反应及细胞凋亡中的作用
目的研究淀粉样β蛋白片段25～35(Aβ25～35)引起的大鼠海马炎症反应、细胞凋亡机制及抗炎药物布洛芬的保护作用.方法大鼠灌胃给予布洛芬7.5 mg·kg-1,连续应用3 周,脑室内单次注射Aβ25～35(10 μL, 1 mmol·L-1),注射后继续应用布洛芬1周后,取脑,进行尼氏染色和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色,研究海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞激活.Western印迹观察白细胞介素-1β(IL-1β), 胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2),有丝分裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK),蛋白激酶C(PKC) 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达.RT-PCR分析IL-1β mRNA表达水平.结果脑室内注射Aβ25～35可引起海马CA1区星形胶质细胞激活和浸润,IL-1β蛋白表达和IL-1β mRNA表达水平明显增加,这种炎症反应伴有海马CA1区锥体神经元损伤.另外,Aβ25～35也能引起磷酸化的p38 MAPK蛋白表达较对照组明显增加,从对照组0.167±0.091增加到0.497±0.059(P<0.01, n=4).使磷酸化的ERK1/2蛋白表达下调, ERK1的表达从对照组0.146±0.010下降到0(P<0.01, n=4).ERK2表达从对照组的0.412±0.054下降到0.131±0.038(P<0.01, n=4).这些改变伴随有caspase-3蛋白表达的增加.但Aβ25～35对PKC的蛋白表达没有影响.布洛芬(7.5 mg·kg-1,连续应用4 周)能明显抑制Aβ25～35引起的IL-1β, p38 MAPK和caspase-3蛋白表达增加.海马CA1区锥体神经元的损伤和星形胶质细胞激活和浸润也被明显减轻.结论 p38 MAPK的激活和磷酸化的ERK1/2的下调在Aβ25～35引起的海马炎症反应及细胞凋亡中起关键性作用,布洛芬能阻止这种炎症反应和细胞凋亡.
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阿魏酸钠对淀粉样β蛋白片段1～40 引起的大鼠海马MAP激酶信号传导通路及凋亡蛋白表达的影响
目的 观察阿魏酸钠(SF)是否对淀粉样β蛋白(Aβ)所致的海马损伤具有保护作用及其信号转导机制.方法 大鼠灌胃给予SF(50,100和250 mg·㎏-1),连续应用3周,左侧脑室内单次注射Aβ1-40(10 μL,1.0 mmol·L-1)制备大鼠痴呆动物模型,注射后6 h,取海马CA1区.Western印迹观察有丝分裂原活化蛋白p38(p38 MAP) 激酶、丝裂原激活的蛋白激酶的激酶4(MKK4)、c-Jun氨基末端激酶(JNK1/2)、P53蛋白、Fas L和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase 3)蛋白表达.应用caspase 3活性测定试剂盒分析caspase 3活性变化.结果 脑室内注射Aβ1-40可引起大鼠海马CA1区磷酸化p38 MAP激酶表达明显增加,从正常0.127±0.018增加到0.95±0.12(n=4, P＜0.01).也可使磷酸化MKK4和JNK1/2表达明显增加.这些MAPK信号传导通路改变伴随有促凋亡蛋白P53和Fas L表达明显增加, caspase 3蛋白表达和活性均明显增加,P53从正常0.053±0.012增加到0.30±0.07(n=4, P＜0.01), Fas L从正常0.25±0.04增加到0.51±0.05(n=4, P＜0.01), caspase 3从正常0.036±0.007增加到0.63±0.041(n=4, P＜0.01),caspase 3活性从正常0.38±0.04增加到0.86±0.09(n=4, P＜0.01). SF (50、100和250 mg·kg-1)连续应用3周,能明显抑制Aβ1-40引起的p38 MAP激酶、磷酸化MKK4和JNK1/2表达明显增加,同时促凋亡蛋白p53和Fas L表达明显增加,降低caspase 3的活性.结论 SF通过抑制Aβ1-40引起的p38 MAP激酶和JNK1/2信号传导通路,产生抗凋亡作用,保护海马免除Aβ1-40引起的神经毒性.
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肾缺血预处理对P38信号通路的影响
大量研究表明,缺血/再灌注(I/R)可以造成严重的组织损伤,因此人们推测,反复短暂的再灌注会造成累积性损伤.
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p38 MAPK在机械牵张致大鼠心脏TREK-1通道表达改变中的作用
目的:研究p38 MAPK信号途径在急性机械牵张致大鼠离体灌流心脏TREK-1通道表达改变中的作用.方法:30只雄性Wistar大鼠随机分成3组,即对照组、机械牵张组和SB202190(p38 MAPK特异性抑制剂)组,每组lO只.利用Langendorff灌流装置等建立离体灌流急性机械牵张的心脏模型;通过We.stem blotting方法检测各组大鼠左室的p38 MAPK、P-p38 MAPK及TREK-1通道的蛋白表达.结果:各组大鼠左室的p38 MAPK表达无明显差异(P>0.05);机械牵张组左室P-p38 MAPK及TREK-1通道的蛋白表达均明显高于对照组(P<0.01),而SB202190组的P-p38 MAPK及TREK-1蛋白表达与对照组比较无明显差异(P>0.05)且低于机械牵张组.结论:离体灌流心脏受机械刺激时p38 MAPK信号途径的激活可能介导了TREK-1通道的表达上调.心脏可能通过这种方式来改变自身电活动,从而减少心律失常发生,起到自身保护作用.
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原癌基因Wip1的研究进展
细胞DNA总是受到来自环境和内源性致突变因素攻击.为保持基因组的完整性和抑制肿瘤发生,细胞在长期检查点机制.
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阿托伐他汀在实验性肺动脉高压中的作用机制
目的:观察阿托伐他汀对大鼠实验性肺动脉高压的治疗效果,探讨其可能治疗机制.方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、肺动脉高压模型组(MCT组)、阿托伐他汀干预组(AS组).测定大鼠平均肺动脉压(mPAP)和右心室肥大指数(RVHI).采用免疫组化法测定大鼠肺血管内皮p38 MAP激酶(p38 MAPK)的表达.结果:与MCT组比较,AS组大鼠的mPAP、RVHI和p38 MAPK的表达均明显降低(均P<0.01).结论:阿托伐他汀能减轻野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压,有可能通过抑制肺血管内皮p38 MAPK的表达而实现.
