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抑制NRP2表达对淋巴管内皮细胞小管成型的影响
目的 探讨抑制神经纤毛蛋白质2(NRP2)基因表达对人淋巴管内皮细胞(LECs)体外形成小管能力的影响.方法从人新鲜包皮中分离纯化LECs,并进行鉴定.实验设NRP2-RNAi/LECs组、mock/LECs组和hECs组,三组分别转染pGensil-NRP2(携带NRP2 siRNA的真核表达载体)、pGensil-1(空载体)及正常LECs细胞.采用RT-PCR和Western blotting检测NRP2 mRNA和蛋白的表达;绘制细胞生长曲线以观察各组细胞生长的差异.对细胞进行三维胶培养,计数小管样结构的数量,并测量小管外径、内径和管壁厚度.结果 与hECs组和mock/LECs组比较,NRP2-RNAi/LECs组NRP2表达水平明显下调(P<0.05),而前两组间无显著差异(P>0.05).生长曲线显示三组细胞的增殖能力无显著差异,均于接种后3～5d进入对数生长期,6～7d进入停滞期.三维胶培养形成的管样结构在NRP2-RNAi/LECs组很少见,其管样结构的数量及小管外径、内径、管壁厚度都明显低于mock/LECs组和hECs组(P<0.05),而后两组间无显著差异(P>0.05).结论 抑制NRP2的表达可抑制LEGs在体外形成小管的能力,并可能抑制肿瘤淋巴管的生成.
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胃癌组织中神经纤毛蛋白2表达与肿瘤淋巴管新生和临床病理因素的相关性
目的：探讨神经纤毛蛋白2（NRP2）在胃癌组织中的表达及其与微淋巴管新生及临床病理因素的相关性。方法回顾性分析河北联合大学附属医院和唐山市人民医院2011年10月至2013年10月手术切除胃癌组织标本（每例患者分别取癌组织、癌旁组织及相对正常区组织）共65例资料，采用免疫组织化学法检测NRP2表达情况，选取D2-40单克隆抗体标记淋巴管，计数微淋巴管密度（ MLD），观测淋巴管形态。结果癌组织、癌旁组织及相对正常区组织各65例，其中胃癌组织NRP2阳性表达率高于癌旁组织和正常组织[61.5％（40／65）比49.2％（32／65）和4.6％（3／65），均P＜0.05]；胃癌组织和正常组织MLD值分别为（12±5）、（23±6）个／mm2，均低于癌旁组织[（44±13）个／mm2，均P＜0.05]，各组淋巴管形态也各不相同；同时癌旁NRP2的表达情况及MLD与肿瘤大小、细胞分化程度、组织浸润深度、淋巴管浸润、淋巴结转移及肿瘤TNM分期均相关（均P＜0.05）。NRP2的表达强度与MLD呈正相关（r＝0.517，P＝0.000）。结论 NRP2可能参与调节胃癌微淋巴管新生和淋巴道转移，在胃癌肿瘤发生、病期进展中具有关键作用，推断其可作为胃癌预后判断的相关指标。
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大肠癌组织中神经纤毛蛋白2的表达及其与肿瘤淋巴管生成和淋巴道转移的相关性
目的 探讨大肠癌组织中神经纤毛蛋白(NRP)-2的表达及其与肿瘤淋巴管生成和淋巴道转移的相关性.方法 系统随机选取河北联合大学附属医院2010年3月至2012年1月手术切除的55例大肠癌患者的大肠癌组织、癌旁组织及相应的正常组织标本,病理结果均经病理组织学证实.采用反转录(RT)-PCR法、免疫组化法检测大肠癌组织、癌旁组织中NRP-2的表达情况,并通过D2-40单克隆抗体特异性标记的肿瘤新生淋巴管,计数微淋巴管密度(MLD)值.结果 大肠癌组织、癌旁组织中新生淋巴管的数目存在差异,MLD值分别为(39±19)、(53±26)个,差异有统计学意义(P＜0.01),新生淋巴管的形态亦存在差异.蛋白水平上,大肠癌组织中NRP-2的表达与MLD值呈正相关(r=0.325,P＜0.05)；基因水平上,大肠癌组织中NRP-2的表达与MLD值呈正相关(r=0.545,P=0.000).NRP-2 mRNA的表达与大肠癌的分化程度、浸润深度、淋巴管浸润、淋巴结转移、Dukes分期相关(均P＜0.05).结论 NRP-2的表达可能调节大肠癌局部淋巴管的生成,并在大肠癌的发生和发展过程中可能发挥重要作用.
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血管内皮生长因子受体3和神经纤毛蛋白2对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨分别阻断和联合阻断血管内皮生长因子受体3(Vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR3)及神经纤毛蛋白2(Neuropilin 2,NRP2)基因的表达对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡的影响.方法 将SGC-7901细胞株分为3大组,VEGFR3阻断组、NRP2阻断组和VEGFR3+NRP2阻断组,各大组中又包含空白对照组、脂质体转染组、无义链转染组(NSODN组)和不同浓度反义链转染组(ASODN组).转染后的各组SGC-7901细胞株经RT-PCR法检测VEGFR3-mRNA及NRP2-mRNA的转录水平.分别采用MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况.结果 反义链转染组VEGFR3-mRNA和NRP2-mRNA的转录水平明显低于其各自的空白对照组、脂质体转染组和NSOND组,表明该组成功阻断基因VEGFR3和NRP2的表达.各组细胞的增殖和凋亡情况差异有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量和时间依赖性.在相同条件下,单独转染VEGFR3-ASODN组对胃癌细胞增殖的抑制及促凋亡作用优于单独转染NRP2-ASODN组,而联合转染组对细胞增殖的抑制及促凋亡作用明显.结论 阻断VEGFR3基因的表达对细胞增殖凋亡的影响大于阻断NRP2基因,联合阻断两个基因的表达,对细胞增殖和凋亡的影响明显大于单独阻断组.
关键词： 血管内皮生长因子受体3 神经纤毛蛋白质2 胃癌 细胞增殖 细胞凋亡 -
131I标记抗神经纤毛蛋白-2单克隆抗体在荷肺腺癌裸鼠中的生物分布及显像
目的 制备131I标记的抗神经纤毛蛋白(NPR)-2单克隆抗体(mAb)(131I-anti-NRP-2-mAb),在体内外观察其与NRP-2表达阳性肿瘤的结合特性,以探讨其应用于NRP-2表达阳性肿瘤显像的可能性.方法 (1)采用氯胺T法制备131 I-anti-NRP-2-mAb,经Sephadex G25柱纯化,用薄层色谱法测定放化纯和稳定性.(2)利用A549细胞进行体外实验,测定131I-anti-NRP-2-mAb的结合率和受体的亲和力.(3)将A549荷瘤裸鼠以随机抽样法随机分为4组,每组4只,分别于尾静脉注射0.37 MBq131 I-anti-NRP-2-mAb,6、24、48和72h后,测定并计算主要器官及组织的放射性摄取值[每克组织百分注射剂量率(％ID/g)]、肿瘤/肌肉放射性(T/M)比值和肿瘤/血液放射性(T/B)比值.(4)将A549荷瘤裸鼠以随机抽样法分为未阻断组和竞争性阻断组,每组3只,未阻断组经尾静脉注射3.7 MBq 131I-anti-NRP-2-mAb,竞争性阻断组经尾静脉注射同等剂量的标记物和100μg未标记的抗NRP-2 mAb,均分别于注射后6、24、48和72 h行γ显像,观察肿瘤放射性浓聚状况.采用两样本t检验分析数据.结果 (1)131 I-anti-NRP-2-mAb标记率为(94.69±3.63)％,放化纯为(98.56±0.48)％;室温下磷酸盐缓冲液中放置72 h,其标记率仍＞85％.(2) 131I-anti-NRP-2-mAb与A549细胞特异性结合率,在60、120、180和240 min时分别为(3.95±0.18)％、(5.19±0.65)％、(6.60±0.36)％和(5.58±0.63)％;加入过量未标记的anti-NRP-2-mAb后,下降至(0.94±0.31)％、(1.12±0.17)％、(1.24±0.25)％和(1.04±0.18)％,阻断组与未阻断组4个时间点细胞结合率间的差异具有统计学意义(t值:11.22、9.89、19.66和9.95,均P＜0.05);与A549细胞表面受体结合的半抑制浓度(IC50)值为(410.8±1.2) nmol/L.(3)注射131I-anti-NRP-2-mAb后,T/B比值和T/M比值均随着时间的延长逐渐增高,在72 h达到高,分别为1.10±0.20和3.83±0.18.(4)γ显像示:未阻断组荷瘤鼠注射131I-anti-NRP-2-mAb后6h即可见肿瘤显影,48 h后肿瘤显像清晰;竞争性阻断组荷瘤鼠在各时间点肿瘤均未见明显显影.结论 成功制备131I-anti-NRP-2-mAb,该标记物对NRP-2具有良好的靶向性.
