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小鼠AMCase基因突变体的cDNA克隆及序列分析
目的克隆小鼠酸性哺乳动物几丁质酶(AMCase),并进行序列分析.方法从BALB/c小鼠胃组织中提取总RNA,逆转录成cDNA,运用PCR技术体外扩增获得AMCase基因,构建pMD18-T/AMCase重组载体,测序后应用DNAMAN 4.0软件与标准序列进行比较,并通过SignalP 3.0和TMHMM Server v.2.0等服务器对等电点、氨基酸组成、信号肽和跨膜结构等特征进行分析.结果所克隆基因共编码473个氨基酸,分子量为51.93kD,等电点为4.73,与AMCase同源性达99.57%,同属18家族的几丁质酶成员,由信号肽(氨基酸1～21)、催化区(氨基酸22～391)、铰链区(氨基酸392～425)和结合区(氨基酸426～473)组成.编码的蛋白质在催化区和铰链区分别发生了突变,292位氨基酸由Ala(丙氨酸)突变为Pro(脯氨酸),404位氨基酸由Thr(苏氨酸)突变为Ser(丝氨酸).结论所克隆的基因为AMCase的一个突变体,其相关生物学信息的明确,为今后运用分子生物学技术进一步深入研究其作用奠定了基础.
关键词： 酸性哺乳动物几丁质酶 突变体 序列分析 DNA -
大鼠变应性鼻炎鼻黏膜AMCase mRNA的表达
目的:研究变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜AMCase mRNA表达,探讨其与AR的关系.方法:30只SD大鼠,随机分为实验组和对照组.实验组20只,卵清白蛋白(OVA)隔日腹腔注射基础致敏2周,继之每日鼻腔局部激发1周,建立大鼠AR模型;对照组10只,生理盐水代替OVA进行实验.末次激发后根据鼻部症状累积评分评判AR造模是否成功,并取所有大鼠双侧鼻腔及中隔黏膜,常规苏木精-伊红染色病理明确AR诊断.提取鼻黏膜RNA,应用反转录合成cDNA,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测AMCase mRNA在大鼠AR鼻黏膜中的表达.结果:RT-PCR检测AMCase mRNA表达,显示实验组与对照组差异有统计学意义(P＜0.05);②AR组AMCase mRNA表达同鼻部症状评分正相关(r=0.411,P＜0.05).结论:大鼠AR鼻黏膜AM-Case mRNA表达量增多,提示AMCase表达上调在变应性鼻炎的发病机制中起作用,抑制该酶活性可以成为AR治疗新的靶点.
关键词： 鼻炎 变应性 酸性哺乳动物几丁质酶 分子生物学 -
哮喘儿童支气管肺泡灌洗液中几丁质酶和真菌特异性抗体的检测水平及意义
目的 探究哮喘患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中几丁质酶(AMcase)和真菌特异性抗体的表达及意义.方法 收集2015年7月至2016年11月该院收治的96例支气管哮喘患儿作为研究对象,分为轻度组(54例)、中度组(26例)、重度组(16例),另选取30例支气管异物患儿作为对照组,收集BALF,对细胞进行计数、分类;酶联免疫法测定BALF上清液中特异性免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)含量;反转录PCR检测BALF中AMcase mRNA表达;Western blot检测BALF中AMcase蛋白表达.结果 哮喘患儿中性粒细胞比例、巨噬细胞比例、嗜酸性粒细胞比例升高,淋巴细胞比例降低,青霉菌、曲霉菌、链铬孢、白色念珠菌中特异性IgE升高,IgA、IgG降低,BALF上清液AMcase升高,均与患儿病情程度有关(P＜0.05).结论 BALF中AMcase、真菌特异性IgE、IgA、IgG水平与患儿哮喘病情严重程度相关,可能参与哮喘病理过程.
关键词： 支气管肺泡灌洗液 哮喘 酸性哺乳动物几丁质酶 真菌特异性抗体
