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C3G基因对H9C2心肌细胞凋亡和增殖的影响
目的 探讨C3G基因对H9C2心肌细胞凋亡、增殖的影响及其机制.方法 构建RNA干扰慢病毒,购买pCXN2-Flag空质粒和pCXN2-Flag-hC3G过表达人C3G mRNA质粒.分别用空白试剂、阴性慢病毒、C3G siRNA慢病毒、C3G siRNA慢病毒+空质粒、C3G siRNA慢病毒+hC3G质粒随机感染和转染H9C2心肌细胞,实验被随机分为5个组,即空白对照组、阴性对照组、沉默C3G组、沉默C3G+空质粒组和沉默C3G+过表达人C3G组.转染质粒72h后,采用RTPCR法检测目的基因C3G mRNA的表达,流式细胞术检测H9C2心肌细胞的凋亡情况,MTT比色法测定细胞增殖率,Western blotting检测细胞C3G、p-ERK1/2、Bax及Flag的蛋白表达水平.结果 阴性对照组和沉默C3G组经嘌呤霉素筛选,85％以上细胞被绿色荧光蛋白标记,提示细胞被慢病毒感染.与空白对照组和阴性对照组比较,沉默C3G组和沉默C3G+空质粒组的细胞中Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率均明显增加(P＜0.01,P＜0.05),且这两组细胞C3G mRNA、C3G蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达水平和细胞增殖率均明显降低(P＜0.01,P＜0.05);与沉默C3G组和沉默C3G+空质粒组比较,沉默C3G+过表达人C3G组的细胞中Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率明显降低(P＜0.01,P＜0.05),且细胞中C3GmRNA、C3G蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达水平和细胞增殖率则明显增加(P＜0.01,P＜0.05).结论 沉默C3G基因能有效抑制细胞的增殖,促进H9C2心肌细胞凋亡;过表达C3G基因能逆转沉默C3G基因对H9C2心肌细胞的影响,表现为细胞凋亡减少,增殖明显,其机制可能与C3G基因对p-ERK1/2蛋白和促凋亡分子Bax的调控有关.
关键词： C3G 心肌细胞 凋亡 增殖 P-ERK1/2蛋白 bcl-2相关X蛋白质 -
鸟苷酸交换因子C3G对心肌细胞生存力的影响及其可能机制
目的 探讨过表达鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine-nucleotide-releasing factor)对心肌细胞生存力的影响及其机制.方法 分别用pCXN2-Flag、pCXN2-Flag-hC3G(过表达人C3G mRNA)质粒瞬时转染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复氧(H/R)于预.实验分为空白组、空质粒组、C3G过表达组、空白+H/R组、空质粒+H/R组,C3G过表达+H/R组.用RT-PCR法检测心肌细胞C3G mRNA的表达,蛋白质印迹分析法检测心肌细胞C3G、p-ERK1/2蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率.结果 C3G过表达组较空白组和空质粒组,C3G过表达+H/R组较空白+H/R组和空质粒+H/R组人C3G mRNA、C3G蛋白、p-ERK1蛋白、细胞增殖率均增加(P均＜0.01),凋亡率均降低(P＜0.05,P＜0.01)；C3G过表达+H/R组较空白+H/R组、空质粒+H/R组p-ERK2蛋白增加(P＜0.01).结论 过表达C3G能促进心肌细胞的生存力,该过程可能是由p-ERK1/2蛋白表达增加和心肌细胞凋亡降低介导的.
关键词： 鸟嘌呤核苷酸交换因子类 C3G 心脏肌细胞 细胞存活 -
Rap1酶激动剂C3G对Ⅰ型卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响
目的 探讨Rapl酶激动剂鸟苷酸交换因子(Crk SH3-domain-binding guanine nucleotidereleasing factor,C3G)对Ⅰ型卵巢癌恶性增殖及侵袭能力的影响.方法 Western blot分别检测Ⅰ型和Ⅱ型入卵巢癌组织中C3G蛋白的表达水平;利用Ⅰ型卵巢癌细胞株OVAR3,构建外源性过表达C3G蛋白的细胞株,通过MTT、平板克隆、流式细胞学实验检测细胞的增殖和凋亡情况;Transwell检测细胞迁移、侵袭能力;Westem blot检测细胞MMP-2、MMP-9的表达.结果 Ⅰ型卵巢癌组织中C3G表达(0.377 6±0.083 1)与良性卵巢肿瘤(0.351 1±0.071 3)及正常对照类似,明显低于Ⅱ型卵巢癌组织[(0.873 5±0.174 6),P＜0.05].低转移潜能卵巢癌细胞株OVAR3在外源表达C3G后表现出增殖减慢(P＜0.05,P＜0.01),凋亡增加(P＜0.05),但迁移和侵袭能力增强(P＜0.05),MMP-2、MMP-9表达增高(P＜0.05).结论 C3G蛋白有抑制增殖和促进侵袭作用,其在Ⅰ型卵巢癌组织中的低表达与其低转移潜能和膨胀型生长模式相关.
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C3G在卵巢癌组织中的表达及其在SKOV3细胞增殖中的作用
目的 探讨鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine nucleotide-releasing factor)在卵巢癌组织中的表达及在卵巢癌SKOV3细胞增殖中的作用.方法 采用Western blot检测比较40例卵巢癌、8例卵巢良性肿瘤及4例正常卵巢组织中C3G的表达水平.应用特异性siRNA下调SKOV3细胞中C3G的表达,通过MTT法和平板克隆实验检测细胞增殖,建立裸鼠皮下种植瘤模型观察移植瘤生长情况.结果 卵巢癌组织中C3G的表达显著高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织,其在卵巢癌、卵巢良性肿瘤分别是正常卵巢组织中的(1.832±0.200) (P＜0.05)、(0.893±0.147)倍.siRNA干扰可使SKOV3细胞中内源性C3G的表达下调79.2％；与野生型细胞组、阴性对照组及空载体对照组相比,C3G干扰组细胞增殖变慢(P＜0.05),克隆形成率下降(P＜ 0.05),移植瘤的平均体积和质量显著下降(P＜0.05).结论 鸟=苷酸交换因子C3G在大多数上皮性卵巢癌中过表达,并促进卵巢癌细胞增殖.
