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PCM修饰脂质体的制备及心肌靶向性初步评价
目的 制备心肌特异性靶向肽PCM修饰的载增强绿色荧光蛋白表达质粒(pEGFP)的脂质体(PCM-LIP),并初步考察其心肌靶向性.方法 采用薄膜分散-超声法,以PCM为配体,DOTAP为阳离子脂质材料制备脂质体,PCM-LIP与pEGFP室温孵育制备载质粒的脂质体.对PCM连接方法进行优化,测定PCM的连接率,并考察脂质体的载药能力、形态、粒径分布、电位及其在磷酸盐缓冲液(PBS)中的稳定性.通过倒置荧光显微镜和流式细胞术考察脂质体转染心肌细胞H9c2的效果,表征其心肌靶向性,筛选PCM的佳用量.结果 PCM通过插入法连接,用量为脂质的3％,与pEGFP孵育后的PCM-LIP呈圆球形,粒径为(261.9±2.2)nm,zeta电位在为(-5.0±0.6)mV,在PBS中具有良好的稳定性,其对心肌细胞的转染效率高于未修饰的脂质体(P＜0.05).结论 PCM可提高脂质体对心肌细胞的转染效率,PCM-LIP具有良好的心肌细胞靶向性.
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长链非编码RNA HIF1A-AS1对大鼠心肌缺血再灌注损伤的调控作用
目的 研究长链非编码RNA HIF1A-AS1对大鼠缺血再灌注损伤的调控作用,并初步探索其机制.方法 构建大鼠心肌缺血再灌注损伤和心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,利用实时定量PCR检测HIF1A-AS1的表达.采用siRNA抑制心肌细胞HIF1A-AS1的表达并制备缺氧/复氧损伤模型,用MTT法检测心肌细胞生长活力,ELISA法检测培养液中乳酸脱氢酶的水平,蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白Beclin-1的表达变化.结果 HIF1A-AS1在缺血再灌注大鼠心肌组织和缺氧/复氧损伤心肌细胞中表达上调.抑制HIF1A-AS1表达可保护心肌细胞,逆转缺氧/复氧刺激导致的心肌细胞生长活力降低、乳酸脱氢酶分泌水平增高、自噬标志蛋白Beclin-1表达增高现象.结论 抑制长链非编码RNA HIF1A-AS1,可能通过抑制心肌细胞的过度自噬抵抗缺血再灌注诱导的心肌损伤.
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鸟苷酸交换因子C3G对心肌细胞生存力的影响及其可能机制
目的 探讨过表达鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine-nucleotide-releasing factor)对心肌细胞生存力的影响及其机制.方法 分别用pCXN2-Flag、pCXN2-Flag-hC3G(过表达人C3G mRNA)质粒瞬时转染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复氧(H/R)于预.实验分为空白组、空质粒组、C3G过表达组、空白+H/R组、空质粒+H/R组,C3G过表达+H/R组.用RT-PCR法检测心肌细胞C3G mRNA的表达,蛋白质印迹分析法检测心肌细胞C3G、p-ERK1/2蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率.结果 C3G过表达组较空白组和空质粒组,C3G过表达+H/R组较空白+H/R组和空质粒+H/R组人C3G mRNA、C3G蛋白、p-ERK1蛋白、细胞增殖率均增加(P均＜0.01),凋亡率均降低(P＜0.05,P＜0.01)；C3G过表达+H/R组较空白+H/R组、空质粒+H/R组p-ERK2蛋白增加(P＜0.01).结论 过表达C3G能促进心肌细胞的生存力,该过程可能是由p-ERK1/2蛋白表达增加和心肌细胞凋亡降低介导的.
关键词： 鸟嘌呤核苷酸交换因子类 C3G 心脏肌细胞 细胞存活 -
微小RNA对心肌梗死中心肌细胞活性的影响及治疗前景
微小RNA(micro RNAs,miRs)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA.心肌梗死(myocardial infaction,MI)是导致心脏重构和慢性心力衰竭的常见心血管事件,诸多miRs被发现在MI的病理生理机制中发挥重要作用.miRs对心肌细胞的存活及增殖活性有多方面影响,这些特性在治疗MI等缺血性心脏病中有着重要的指导意义.本文首先引入MI及miRs的研究概况,随后详细介绍了在心肌细胞存活及增殖中承担一定角色的miRs,后展望了miRs应用于MI治疗的前景并提出局限性.
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载有人心肌细胞钠离子通道及PRKAG2基因的HEK-293T细胞模型的建立
目的 尝试建立类似PRKAG2心脏综合征钠离子通道功能的HEK-293T细胞模型,为探讨PRKAG2心脏综合征心律失常机制奠定基础.方法 分别构建人PRKAG2基因质粒载体和SCN5A基因质粒载体,共转人胚肾细胞(HEK-293T);应用免疫荧光法、Real-time PCR、蛋白质印迹法检测HEK-293T细胞转染结果及基因表达情况.结果 转染48 h后,HEK-293T细胞在细胞免疫荧光显微镜下可见红色荧光和绿色荧光.Real-time PCR及蛋白印迹结果证实:单独转染SCN5A组、SCN5A+ PRKAG2组、SCN5A+G100S组、SCN5A+ R302Q组SCN5A基因及蛋白均有表达,而在空白对照组无表达,差异有统计学意义(P＜0.05);SCN5A+PRKAG2组PRKAG2基因及蛋白高表达,而空白对照组、SCN5A组、SCN5A+ R302Q组、SCN5A+G100S组表达量较低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功建立类似PRKAG2心脏综合征钠离子通道的HEK 293T细胞模型,为后续研究奠定了基础.
