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去泛素化酶OTUB1影响p97/NPL4复合体形成调控肿瘤发生
目的 探讨去泛素化酶卵巢肿瘤蛋白(OTU)域所含泛素乙酰结合蛋白1(OTU domain containing ubiquitin aldehyde-binding protein 1,OTUB1)调控p97/含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)泛素化参与肿瘤发生的机制.方法 通过生物信息学分析和免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、免疫荧光、CCK-8(Cell Counting Kit-8)检测法等分子生物学及细胞生物学方法,分析和检测OTUB1在肿瘤中的表达情况,OTUB1与p97的相互作用,OTUB1对p97蛋白水平、泛素化修饰水平的影响,OTUB1对核蛋白定位同系物蛋白4(nuclear protein localization 4 homolog,NPL4)和p97复合体形成的影响,以及敲低OTUB1对细胞增殖能力的影响和对p97抑制剂的应答机制.结果 癌基因组图集(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析发现OTUB1在多种肿瘤中异常表达,Co-IP结果显示,OTUB1与p97存在相互作用,在细胞中过表达野生型OTUB1后p97泛素化水平下调,而过表达OTUB1活性缺失突变体则p97泛素化水平无变化;敲低OTUB1后p97泛素化水平上调,且p97和NPL4相互作用减弱.敲低OTUB1细胞增殖能力减弱,使用p97抑制剂处理后细胞生长不再受明显调控.结论 OTUB1与p97相互作用并调控p97的泛素化和p97与NPL4复合体的形成,进而调控肿瘤发生.
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内质网相关降解通路小分子抑制剂与传统抗癌药物联合运用对肿瘤细胞的抑制作用
目的 探究内质网相关降解通路(endoplasmic reticulum-associated degradation,ERAD)小分子抑制剂EeyarestatinⅠ (Eer Ⅰ)与传统抗癌药物联合运用对肿瘤细胞的抑制作用.方法 不同剂量的Eer Ⅰ处理结肠癌SW480和胰腺癌PANC-1细胞,MTS法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率;Eer Ⅰ单独或与抗癌药物顺铂(cisplatin,CDDP)和硼替佐米(bortezomib,BTZ)联用处理SW480和PANC-l细胞,Western blot法检测细胞中Poly ADP-ribose polymerase (PARP)及其剪切体和糖调节蛋白(GRP78/BiP)的蛋白表达.结果 Eer Ⅰ抑制SW480和PANC-1细胞增殖,促进细胞凋亡(P＜0.01),且呈剂量-效应关系;联合用药的实验结果显示Eer Ⅰ提高了SW480和PANC-1细胞对CDDP和BTZ的敏感度(P＜0.01);Western blot法检测结果表明,联合用药促进了PARP在SW480和PANC-1细胞中的剪切,同时BTZ处理可提高BiP蛋白的表达,提示激活内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)反应.结论 ERAD通路抑制剂EerⅠ可明显增强传统抗癌药物CDDP和BTZ的抗癌活性,这为抗癌新药研发及肿瘤耐药性逆转剂的研究提供了新的线索.
关键词： 内质网相关蛋白降解通路 ERS反应 p97 化疗治疗 -
p97在人脑胶质瘤细胞铁代谢中的作用
目的探讨黑素转铁蛋白p97在人脑胶质瘤细胞铁摄取中的作用. 方法应用含放射性柠檬酸铁(59Fe-Citrate)的培液孵育人脑胶质瘤细胞株GBM及BT325,以不同浓度PI-PLC及pronase处理细胞,γ-闪烁计数仪测定cpm值 ,得到胶质瘤细胞的相对Fe摄取水平.结果在一定浓度PI-PLC作用下, 肿瘤细胞59Fe 摄取水平显著降低,随着PI-PLC浓度的增加,加入pronase和不加入pronase的细胞59 Fe摄取量接近一致.结论 p97在人脑胶质瘤细胞高表达并在其铁摄取中起重要作用.
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p97在骨肉瘤的表达及与远处转移的关系
目的 探讨骨肉瘤组织中p97的表达与远处转移的关系.方法 运用免疫组织化学SP法检测60例普通型骨肉瘤组织p97的表达情况,21例骨软骨瘤组织作为对照.结合临床随访结果,判断p97表达与骨肉瘤远处转移病例之间的关系.结果 60例普通型骨肉瘤组织中p97低表达24(40.0%)例,中度表达10(16.7%)例,高表达26(43.3%)例;21例骨软骨瘤组织中p97低表达14(66.6%)例,中度表达6(28.6%)例,高表达1(4.8%)例,二者统计学差异明显(P<0.01).14例发生远处转移的骨肉瘤组织中p97低表达2(14.3%)例,中度表达1(7.1%)例,高表达11(78.6%)例;46例无远处转移的骨肉瘤组织中p97低表达22(47.8%)例,中度表达9(19.6%)例,高表达15(32.6%)例,二者统计学差异显著(P-0.010).尤其低表达与高表达比较差异更明显(P<0.01 ).但是,p97的表达与组织学类型无明显的相关性(P>0.05).结论 p97可能参与了骨肉瘤发生与远处转移,这提示p97检测可能成为判断骨肉瘤发生远处转移的一项有价值的指标;同时p97为骨肉瘤的诊疗提供一种新的可能分子靶标和途径.
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非小细胞肺癌中p97蛋白的表达及其临床意义
目的研究腺苷三磷酸酶(p97)在非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)组织中的表达及与侵袭、转移的关系.方法采用免疫组织化学和Western-Blot方法对60例NSCLC、癌旁组织以及10例正常肺组织进行p97蛋白定位表达及表达水平研究.结果在免疫组化试验中,p97在NSCLC组织中的阳性表达率为65.0%(39/60),瘤旁组织为28.3%(17/60),两者比较差异有统计学意义,X2=6.1,P=0.047;在Western印迹实验中,p97在NSCLC组织中的阳性表达率为81.7%(49/60),瘤旁组织为35.0%(21/60),非肿瘤肺组织为10%(1/10),差异有统计学意义,X2=7.5,P=0.023.Western印迹与免疫组化检查结果明显正相关性,r=0.293,P＜0.05.在NSCLC组织中,p97蛋白阳性表达率与肿瘤转移(P=0.0020)和肿瘤分期(P=0.0150)之间的差异有统计学意义;而与瘤体大小、病理分级、组织类型的差异无统计学意义.结论NSCLC在蛋白水平上表达p97增加,与肺癌侵袭和转移有关.
关键词： 非小细胞肺癌 p97 肿瘤转移免疫组织化学 免疫印迹
