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膜穿透活性文献资料
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穿膜肽AR-23增强聚乙烯亚胺介导的基因转染效率及其机制的初步研究
目的 研究穿膜肽AR-23[蜂毒肽相关肽,来自日本蛙(Rana tagoi)]的极性电荷区对细胞穿膜作用的影响及其在促进聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导的基因转染中的作用.方法 分别合成了穿膜肽AR-23及由疏水核心区组成的截短肽AR-20;利用圆二色谱(CD)分析二级结构;通过溶血实验比较两者的细胞膜穿透能力;利用去极化实验分析穿膜肽与细胞膜的相互作用方式;将穿膜肽与PEI按一定比例混合,以绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(luciferase)为报告基因检测基因在HeLa和RAW264.7细胞中的转染效率,用MTT法测定基因转染后细胞的毒性.结果 在以甲醇模拟的细胞膜环境中,AR-23呈现出典型的α-螺旋结构,α-螺旋率为37.6%,而AR-20未呈现出典型的α-螺旋结构峰;在偏酸性和中性条件下,AR-23均能穿透细胞膜导致红细胞溶血,而AR-20不具备溶血作用;AR-23对细胞膜具有较强的去极化作用,而AR-20去极化能力极弱;AR-23可明显增强PEI介导的基因在HeLa和RAW264.7细胞中的转染效率,并且不引起转染后细胞的S毒性,AR-20则不具备增强基因转染效率的作用.结论 AR-23的极性电荷区对于维持其α-螺旋结构和穿膜能力至关重要.AR-23能够提高PEI介导的基因转染效率而不会导致细胞毒性,是一种理想的基因转染增强剂.
