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氧化苦参碱联合维生素C抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖
胃癌是消化系统中比较常见的恶性肿瘤,胃癌的治疗以手术切除及放化疗为主,但放化疗毒副作用大、且具有严重的耐药性[1-2].因此,寻找一种毒副作用小且疗效较好的药物是目前研究的热点.氧化苦参碱(oxymatrine,OM)是从我国豆科类植物苦豆子中提取出来生物碱,具有抗肝炎病毒、改善肝细胞功能、免疫调节、抗肿瘤、抗炎等多种生物学活性[3].而维生素C具有强的抗氧化作用,在体内有一定的解毒作用,可抑制病毒的增殖,减少体内自由基[4].将二者联合应用进行体外抑制肿瘤的研究尚未见报道.本实验观察了OM、维生素C单药及联合用药对体外培养人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用.
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慢病毒载体介导Nanog小分子干扰核糖核酸抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长
目的 构建对Nanog基因有干扰作用的慢病毒载体,探讨其在人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤模型中的表达,检测其对裸鼠移植瘤生长的影响.方法 将前期细胞实验验证有效的siRNA序列构建于慢病毒载体中,制备携带shRNA-Nanog的慢病毒,同时构建胃癌裸鼠移植瘤模型.以lentivirus-shRNA-Nanog感染的裸鼠作为实验组(目的组),以无关序列慢病毒感染的裸鼠(空载体组)及未感染的裸鼠(未感染组)作为对照组,测量肿瘤瘤体体积及质量的变化;活体荧光成像观察总荧光强度及转移情况,Western blot法检测移植瘤组织中Nanog蛋白的表达情况;TUNEL法观察其对皮下移植瘤细胞凋亡的影响.结果 经基因测序鉴定,Nanog基因shRNA重组慢病毒表达载体构建成功.活体荧光成像显示感染27 d后,目的组小鼠肿瘤总荧光强度明显低于空载体组和未感染组,裸鼠移植瘤瘤体积及瘤质量小于未感染组及空载体组;Western blot法显示目的组Nanog蛋白表达较对照组明显降低;TUNEL结果显示目的组凋亡指数较对照组明显增大,而空载体组与未感染组比较,差异无统计学意义.结论 成功构建了Nanog基因shRNA表达载体并包装成慢病毒颗粒,在体内感染能明显抑制肿瘤生长.
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三氧化二砷联合热疗对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响及潜在机制的实验研究
目的:探讨三氧化二砷联合热疗对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响并探讨其潜在的分子机制.方法:采用MTr检测细胞的活力;利用集落形成实验检测细胞的生长;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测蛋白水平.结果:三氧化二砷浓度依赖性的抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖.与三氧化二砷组或者热疗组相比,三氧化二砷联合热疗可以显著性抑制SGC-7901细胞活力和细胞生长,同时增加细胞的凋亡率(P＜0.05);三氧化二砷联合热疗能够使Go/G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低(P＜0.05).Western blot实验发现,与三氧化二砷组或者热疗组相比,三氧化二砷联合热疗可以增加cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平,同时降低Bcl-2蛋白水平(P＜0.05).与三氧化二砷组或者热疗组相比,三氧化二砷联合热疗同时可以降低B-catenin、c-myc以及cyclin D1蛋白水平(P＜0.05).结论:三氧化二砷联合热疗抑制SGC-7901细胞增殖,其机制可能与改变细胞周期,促进细胞凋亡,同时抑制Wnt/β-catenin信号通路活性有关.
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缺氧对于人胃腺癌SGC-7901细胞MTA1表达及侵袭力的影响
目的:研究缺氧对胃腺癌细胞生物学行为的影响及可能机制.方法:对人胃腺癌SGC-7901细胞进行缺氧培养,对照组有氧培养,用Transwell实验检测两组细胞的侵袭能力,用Western blot法和RT-PCR检测两组细胞MTA1表达情况.结果:实验组细胞侵袭能力增加,穿过膜细胞数明显高于对照组[(28±5.6)/HPF vs( 13 ±4.1 )/HPF,P＜0.05]；MTA1 mRNA表达水平明显高于对照组(P＜0.05),实验组中MTA1蛋白相对含量也明显高于对照组(P＜0.05).结论:缺氧导致SGC-7901细胞侵袭能力增加,这与其使细胞中MTA1表达增加有关.
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miR-17-92基因簇反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖与侵袭的抑制作用
目的:探讨miR-17-92基因簇反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖及侵袭的影响.方法:合成miR-17-92基因簇中miR-17、miR-18a、miR-20a的反义寡核苷酸,通过实时荧光定量PCR验证miR-17、miR-18a、miR-20a反义寡核苷酸对SGC-7901细胞的miR-17、miR-18a、miR-20a的抑制效果,然后利用MTT、Transwell检测抑制表达后对细胞增殖及侵袭的影响.结果:miR-17、miR-18a、miR-20a的反义寡核苷酸能够抑制对应miRNA的表达,同时抑制了胃癌细胞的增殖与侵袭.结论:miR-17-92基因簇可能在胃癌发生发展中起到了癌基因的作用.
关键词： miR-17-92基因簇 胃癌 SGC-7901 增殖 转移 -
siRNA沉默mdm2基因对胃癌细胞SGC-7901增殖和Rb基因蛋白表达的影响
目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对mdm2基因的siRNA,抑制mdm2基因的表达并诱导胃癌细胞系SGC7901细胞的凋亡.方法:将mdm2 siRNA转染入SGC7901中,通过RT-PCR检测转染前后各组细胞mdm2 mRNA表达水平;Western-blot技术检测转染前后各组细胞mdm2、Rb蛋白表达水平;在转染后不同时间点收集细胞台盼蓝染色后,计数阳性细胞数,统计细胞增殖情况.结果:转染mdm2 siRNA后的SGC7901细胞中mdm2基因mRNA水平及mdm2蛋白表达水平显著下降,Rb蛋白表达水平增加;细胞的增殖受到显著抑制.结论:特异性siRNA可以下调SGC-7901细胞中mdm2 mRNA及蛋白表达水平,同时引起Rb蛋白表达上调,干涉后细胞凋亡明显增多.提示mdm2基因与Rb基因可能存在某种相互拮抗的作用.mdm2蛋白表达下调及Rb蛋白表达上调可能是凋亡发生的机制之一.mdm2基因可作为胃癌治疗的潜在靶点.
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不同浓度稀释碘伏联合顺铂对SGC-7901胃癌细胞生长的影响
目的 进一步探讨不同浓度稀释碘伏对体外培养SGC-7901细胞生长的影响.方法 体外培养SGC-7901细胞,待其生长至对数期时,接种96孔板,至细胞贴壁后分别以浓度梯度的稀释碘伏及碘伏与顺铂联合处理SGC-7901细胞,MTT法检测两种方案的药物对细胞增殖的影响;AO/EB染色方法观察其对肿瘤细胞形态学改变的影响.结果 浓度梯度的稀释碘伏及碘伏联合顺铂对SGC-7901细胞的生长均有明显的增殖抑制作用,且呈浓度时间依赖性;AO/EB染色结果可见:随药物浓度的增大,活细胞量逐渐减少,胞质变少,体积缩小、胞核浓缩,于镜下可见凋亡小体.结论 稀释碘伏对SGC-7901细胞的增殖抑制作用显著,对细胞凋亡具有一定的诱导作用.
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百合中性多糖对5-FU增效减毒作用及其对体外对肿瘤细胞的抑制作用
目的 观察百合中性多糖(A4糖)对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)抗肿瘤的增效减毒作用及其对体外培养的SGC-7901人胃腺癌细胞增殖的影响.方法 建立移植性S180肿瘤小鼠模型,分别观察A4糖单用以及与5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)联合应用时的外周血细胞变化、抑瘤率、脾及胸腺指数的变化；体外培养SGC-7901细胞,MTr法测定A4糖对SCG-7901细胞增殖的影响.结果 A4糖对经5-Fu化疗所引致血中白细胞数量降低的S180荷瘤小鼠有明显的升高白细胞的作用,对化疗所引起脾脏及胸腺指数下降有显著的改善作用；A4糖对体外培养的SGC-7901细胞的生长亦有明显的抑制作用.结论 百合中性多糖(A4糖)可通过提高机体免疫功能,从而增强化疗药的抑瘤效果,同时减轻化疗时出现的毒副作用；对体外培养的SGC-7901的生长亦有一定的抑制其增殖的作用.
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沉默Livin基因对胃癌细胞SGC-7901生物学行为的影响
目的:探讨沉默Livin基因表达对胃癌细胞SGC-7901细胞形态和凋亡的影响.方法:取SGC-7901细胞,分成pSUPER-neo-LsB组、空载体pSUPER-neo-LsC组、空白对照组,用脂质体包裹法转染,空白对照组不转染.转染48h后,FCM法、TUNEL法检测细胞凋亡,电镜观察凋亡细胞.结果:人胃癌癌细胞株SGC-7901细胞瞬时转染针对Livin的表达载体后,出现早期凋亡细胞和凋亡小体.TUNEL检测SGC-7901细胞凋亡指数显著高于对照组.FCM法计算细胞的凋亡率与转染空载体pSUPER-neo-LsC组和空白对照组比较均有显著性差异.结论:沉默livin基因可以有效的改变SGC-7901细胞的生物学行为,Livin基因可能成为胃癌治疗的新靶点.
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β咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901小鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白表达的影响
目的 探讨新疆地道药材骆驼蓬中提取物β咔啉类生物碱对人胃癌细胞SG-7901昆明小鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白表达的影响.方法 建立人胃癌昆明小鼠移植瘤模型,随机分为β咔啉类生物碱组,5-FU组及空白对照组,每组各15只.β咔啉类生物碱行口服给药,5-FU组及空白对照组行腹腔灌注给药.给药21天后,检测小鼠体质量、肿瘤体积、瘤质量,并计算抑瘤率.使用免疫组化和Western Blotting技术检测各组瘤组织中Bcl-2、Bax、Survivin、Fsa、P53蛋白表达.结果 β咔啉类生物碱能较好的抑制胃癌小鼠移植瘤的生长,能明显使肿瘤缩小.免疫组化及Western Blotting结果显示,经β咔啉类生物碱处理后的移植瘤中Bcl-2、Survivin、Fsa、P53蛋白表达较空白对照组下降,而Bax蛋白表达较空白对照组上升.结论 咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901小鼠移植瘤有明显的抑制作用,其机制可能与下调Bcl-2、Survivin、Fsa、P53的表达,上调Bax的表达,诱导胃癌细胞凋亡有关.
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经腹腔注射地塞米松和与环磷酰胺建立昆明种小鼠胃癌模型的比较
目的 观察经腹腔注射地塞米松(DEX)与环磷酰胺(CTX)两种不同药物对小鼠免疫抑制的作用及成瘤率的比较,为小鼠胃癌模型的建立提供实验依据.方法 将昆明小鼠随机分为空白对照组、地塞米松组及环磷酰胺组,每组小鼠各20只,雌雄各半,分别经腹腔注射给予0.9％生理盐水、DEX、CTX连续7d.后将SGC-7901人胃癌细胞悬液经腹腔注射在CTX组及DEX组小鼠体内,观察10d,结束实验.流式细胞仪检测其CD3+、CD4+、CD8+数值变化,ELISA检测IL-4,CCK-8法检测脾脏细胞活性.结果 1)与空白对照组相比,免疫抑制组(CTX组和DEX组)血清IL-4含量、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值及脾细胞转化吸光度差值明显降低(P＜ 0.05);CTX组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值、脾细胞转化吸光度、血清IL-4含量差值比DEX组下降明显,差异有统计学意义(P＜0.05).2)CTX组(73.68％)较DEX组(40％)小鼠成瘤率高,差异有统计学意义(x2=22.718,P＜0.01).结论 通过接种肿瘤细胞,在昆明种SPF级小鼠上成功构建了SGC-7901人胃癌细胞肿瘤模型,对成瘤小鼠相关细胞因子进行检测分析,由环磷酰胺预处理后引起的小鼠免疫抑制成瘤率相比地塞米松导致小鼠免疫抑制成瘤率较高(P＜0.05),说明环磷酰胺在免疫抑制后小鼠经腹腔注射成瘤率方面较地塞米松有一定优势.
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左金方、黄连、吴茱萸诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用比较
目的:比较左金方、黄连、吴茱萸对人胃癌细胞SGC-7901生长的活性抑制和凋亡诱导作用.方法:采用MTT比色法观察左金方、黄连、吴茱萸对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析细胞凋亡率;Hoechst 33258染色观察细胞形态学变化以及Western blot方法检测左金方、黄连、吴茱萸对人胃癌细胞SGC-7901中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.结果:左金方和黄连分别作用SGC-7901细胞后,均能抑制细胞活性,且与时间呈依赖关系;1.0 mg·mL-1左金方和对应浓度的黄连(0.857 mg·mL-1)作用于SGC-7901细胞48 h,细胞凋亡率分别为(36.40±1.59)％和(21.90±0.27)％,与对照组(1.69±1.91)％比较差异均有统计学意义(P＜0.01),组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01),对应浓度的吴茱萸(0.143mg·mL-1)几无作用;Hochest染色细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征;左金方和黄连均可降低SGC-7901细胞Bcl-2基因表达和增加Bax基因表达.结论:左金方与黄连均可通过上调Bax/Bcl-2的比率诱导胃癌细胞的凋亡,但左金方的作用优于黄连(P＜0.01),吴茱萸几无作用.
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sFRP1过表达对人胃SGC-7901细胞的影响及其影像学研究
目的:拟探讨分泌型卷曲相关蛋白1 (sFRP1)对胃癌SGC-7901细胞及肿瘤影像表现的影响.方法:sFRP1真核表达载体及空载体转染SGC-7901细胞,筛选稳定表达细胞.MTT法检测转染前后细胞增殖变化并绘制细胞增殖曲线.体内实验通过裸鼠腹腔及尾静脉注射建立两组腹腔种植及肺转移肿瘤模型,经PET/CT及能谱CT观察影像学变化.后通过免疫组织化学、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记实验(TUNEL)进一步明确肿瘤凋亡、增殖、微血管增生情况.结果:体内外实验证实转染后,细胞增殖和成瘤能力增强.PET/CT及宝石CT均出现阳性表现.免疫组化及TUNEL示转染后凋亡减少,增殖增多,微血管增加.结论:sFRP1高表达在体内体外均可促进SGC-7901增殖,具有肿瘤促进作用,有利于在PET/CT及宝石CT获得阳性表现.
关键词： 分泌型卷曲相关蛋白1 SGC-7901 PET/CT 能谱CT
