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siRNA抑制结肠癌细胞livin基因凋亡
目的:观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默livin基因在结肠癌细胞中的表达情况,探讨livin基因对结肠癌细胞生长、凋亡的影响.方法:自行设计针对livin基因的两条siRNA表达载体并转染至生长期的结肠癌细胞中,筛选后采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、MTT、TUNEL分别比较检测转染前后结肠癌细胞livin基因的表达.结果:siRNA对照组与空siRNA载体组的livinα/β mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);但转染siRNA组Livin1/2 mRNA表达显著降低,明显低于siRNA对照组和空siRNA载体组(P＜0.05).细胞生长曲线测定经F检验三组间无显著性差异.转染siRNA载体沉默livinα/β表达,细胞凋亡率显著增加.结论:siRNA沉默livin基因能抑制结肠癌细胞的生长,促进结肠癌细胞的凋亡.
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Livin反义寡核苷酸对人HL60细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨Livin mRNA反义寡核苷酸(ASODN)对人白血病细胞(HL60)增殖及凋亡的影响.方法 用免疫组织化学检测Livin蛋白表达,设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),脂质体转染HL60细胞.用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞增殖,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测LivinmRNA的表达,原位末端标记技术(TUNEL)、电镜检测细胞凋亡率和形态学改变.结果 Livin ASODN在终浓度为600 nmol/L作用HL60细胞48 h时,能明显地抑制其增殖,降低Livin mRNA的表达,HL60细胞在形态学上出现明显的凋亡改变,细胞凋亡率显著增加(P<0.01).结论 Livin ASODN可有效抑制HL60细胞的增殖,下凋Livin基因表达,并促进H160细胞凋亡,在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖中发挥重要作用.
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Livin在乳腺癌中的表达及与c-erbB-2和激素受体的关系
目的 探讨Livin基因在乳腺癌中的表达及与c-erbB-2基因和激素受体之间的表达关系.方法 采用免疫组化S-P法及原位杂交技术检测Livin mRNA和其蛋白在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌中表达及ER/PR和c-erbB-2的表达.结果 Livin蛋白和mRNA在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌的表达阳性率之间差异显著(P<0.01),Livin蛋白与mRNA表达之间差异不显著(P>0.05).Livin表达与临床分期、淋巴结转移和患者年龄有关(P<0.05),与肿瘤大小和组织学分级无关;Livin蛋白与c-erbB-2基因在乳腺癌中的表达无相关性(P>0.05).Livin表达阳性的乳腺癌ER标记指数(32.25±34.90)%明显低于Livin表达阴性的乳腺癌(59.29±34.04)%(P<0.01),而PR的标记指数在两者之间差异不显著(P>0.05).结论 Livin基因及蛋白在乳腺癌中表达上调,提示在乳腺癌的发生、发展中起重要作用,有望成为一种有效、敏感的肿瘤标记物,可作为判断乳腺癌预后的新分子标记物和乳腺癌诱导凋亡治疗的新靶点.
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抗凋亡基因livin在急性非淋巴细胞白血病细胞中的表达及临床意义
为了探讨急性非淋巴细胞白血病(ANLL)原代细胞livin基因表达及临床意义,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测46例急性非淋巴细胞白血病患者livin基因mRNA表达水平,以10名健康人为正常对照,以HL-60细胞株为阳性对照.结果表明,livin mRNA在初治ANLL患者中的表达较正常对照组明显升高(p＜0.05);治疗缓解后表达明显下降(p＜0.05);复发后其表达又升高.在初治ANLL患者中,livin mRNA表达阳性的患者完全缓解率(CR)低于表达阴性的患者(p＜0.05).结论:livin基因过度表达和ANLL的发病呈正相关;livin基因高表达的患者完全缓解率低,预后不良;livin可作为急性非淋巴细胞白血病的发病、复发及预后判断的指标之一.
关键词： 抗凋亡基因 livin基因 急性非淋巴细胞白血病 -
siRNA特异性抑制K562细胞Livin基因表达及其诱导凋亡作用
本研究探讨小分子RNA干扰技术抑制livin基因表达对白血病细胞系K562细胞凋亡的影响.设计合成livin特异性小干扰RNA(siRNA),核转染K562细胞,培养转染后的K562细胞,用RT-PCR检测livin mRNA的表达,Western blot检测Livin蛋白的表达.以未转染细胞作对照,同时转染带有增强型绿色荧光蛋白的载体作为阳性对照,用流式细胞术检测其细胞绿色荧光以确定转染效率.用膜联蛋白Ⅴ及碘化丙锭双染法检测细胞凋亡率.结果表明,电穿孔的转染效率可达50％.siRNA既可以抑制livin mRNA表达,也可以抑制livin蛋白表达.特异性siRNA转染细胞后48h细胞凋亡率为(27.41±2.30)％,与对照组(9.63±0.89％)比较明显提高(P＜0.05).结论:SiRNA可以抑制livin基因的表达,并能抑制livin基因的抗凋亡作用.
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Livin蛋白在原发性支气管肺癌中的表达及其临床意义
[目的]研究Livin蛋白在原发性支气管肺癌中的表达及其临床意义.[方法]应用免疫组织化学SP法检测52例手术切除的肺癌石蜡标本及7例正常肺组织中的Livin蛋白表达情况.[结果](1)肺癌患者肺组织中Livin蛋白表达的阳性率为48.1％,正常肺组织呈阴性表达；(2)男性肺癌患者Livin蛋白的表达阳性率为59.26％,女性为36.00％,两者相比差异有统计学意义(P＜0.05)；(3)支气管肺癌的病理类型、组织分化程度、临床分期对Livin蛋白表达阳性率的影响无统计学差异(P＞0.05).而有淋巴结转移的肺癌患者Livin蛋白表达阳性率(57.89％)高于无淋巴结转移的患者(36.37％,P＜0.05)；(4)吸烟指数≥400的肺癌患者Livin蛋白表达阳性率53.57％,吸烟指数＜400的患者为33.33％,两者相比差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]Livin蛋白的高表达在支气管肺癌的发生发展过程中起重要作用,Livin蛋白的表达与肺癌的病理类型、组织的分化程度、临床分期无关,与有无淋巴结转移、吸烟指数密切相关.
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SiRNA沉默livin基因表达促进胃癌细胞凋亡
目的:研究livin特异性小分子干扰RNA(siRNA)沉默胃癌SGC-7901细胞livin基因及对促胃癌细胞凋亡的影响.方法:设计针对人源livin基因的两条SiRNA:si-livin1和si-livin2,分别转染至对数生长期的胃癌SGC-7901细胞;逆转录酶链式反应(RTPCR)检测转染前后胃癌SGC-7901细胞livin基因表达的变化,MTT法检测转染前后该细胞对5-FU、顺铂的半数抑制浓度(IC50)的变化以及检测转染前后细胞增殖能力的变化,PI染色后流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡的变化.结果:livin特异性siRNA转染胃癌SGC-7901细胞48 h后,si-livin1组livin α mRNA(灰度值表示)表达较空白对照组和阴性对照组显著减少(livin α:0.167±0.013 vs 0.403±0.036,0.389±0.053;livin β:0.181±0.028 vs 0.413±0.041,0.404±0.029,均P＜0.01).而si-livin2组livin mRNA表达相比于空白对照组和阴性对照无显著差异;转染siRNA后,si-livin1组胃癌细胞生长缓慢,生长曲线较对照组平缓;si-livin1组细胞对5-FU和顺铂半数抑制浓度IC50较空白对照组和阴性对照组显著降低(5-FU:34.07±2.98 vs 74.39±4.91,69.85±4.57;顺铂:4.56±0.35 vs 9.07±0.44,7.96±0.64,均P＜0.01);转染siRNA后,si-livin1组胃癌细胞自发凋亡率较空白对照组和阴性对照组增加(11.07±1.36vs 3.54±2.89,6.72±1.77,P＜0.01,P＜0.05).5-FU和顺铂作用后,si-livin1组胃癌细胞凋亡率较空白对照组和阴性对照组显著增加(5-FU:34.90±1.76 vs 11.54±0.83,13.54±2.55;顺铂:48.14±2.70 vs 14.51±0.35,15.71±0.34,均P＜0.01).结论:RNA干扰可有效沉默livin基因表达从而抑制胃癌SGC-7901细胞生长及增加该细胞凋亡敏感性,livin可能成为胃癌凋亡治疗途径的一个分子靶点.
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siRNA沉默Livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响
目的:观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默Livin基因在胃癌BGC-823细胞中的表达, 并探讨Livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响.方法:自行设计两条针对Livin基因的siRNA:Livin-sh-1和Livin-sh-2, 以此构建相应的表达载体并分别转染至对数生长期胃癌BGC-823细胞, 经G418筛选后分别采用半定量RTPCR检测不同siRNA实验分组细胞BGC-823mRNA水平变化, 四氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖、流式细胞仪检测胃癌细胞的凋亡.结果:siRNA对照组与空siRNA载体组Livinα/β mRNA表达差别无显著性; 但转染siRNA组Livin α/β mRNA表达显著低于空白对照组和空siRNA载体组(Livin α:0.11±0.07 vs 0.37±0.10, 0.34±0.08; Livin β:0.13±0.04 vs 0.43±0.09, 0.45±0.11, 均P<0.05). 空白对照组与空siRNA载体组相比, 24、48、96 h和1 wk时细胞生长未受影响; 而siRNA组在转染后24 h和48 h细胞生长未受影响, 但在96 h和1 wk时则被明显抑制( P<0.01). 转染siRNA组的细胞的凋亡率与空白对照组和转染空siRNA载体组相比显著增加(14.85%±1.35% vs 4.51%±0.36%, 6.13%±0.71%, 均P<0.05).结论:siRNA沉默Livin基因能抑制胃癌细胞的生长, 促进胃癌细胞的凋亡, Livin基因有可能成为胃癌治疗的新靶点.
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Livin基因在胆管癌组织中的表达及其临床意义
Livin基因是新近发现的凋亡抑制蛋白(inhibitor ofapoptosis protein,IAP)基因家族的新成员.它的表达产物Livin蛋白是迄今为止抗凋亡作用强的IAP之一[1],在多数肿瘤组织中发现有Livin的异常高表达现象[2].我们采用免疫组化的方法检测Livin基因在肝外胆管癌组织中的表达,分析了其表达与临床病理和预后间的关系.
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Livin基因在浅表性膀胱癌中的表达及其与肿瘤复发的关系
目的 检测凋亡抑制蛋白Livin在人浅表性膀胱移行细胞癌组织中的表达,并分析其与肿瘤分期、分级以及复发的关系.方法 采用免疫组织化学法检测浅表性膀胱移行细胞癌(TCCB)组织标本中Livin蛋白的表达情况. 结果 Livin阳性表达率为57.5%,G1级阳性表达率53.8%,G2级阳性表达率59.3%,不同的病理分级组间表达差异无统计学意义(P>0.05).Ta期肿瘤阳性表达率为46.2%,T1期肿瘤阳性表达率为63.0%,不同临床分期组间表达差异无统计学意义(P>0.05).Livin表达与肿瘤是否多发无关.平均随访21.9个月,肿瘤复发率为55%,其中Livin表达阳性组的复发率为73.9%,平均复发时间为14.7个月,Livin表达阴性组复发率为29.4%,平均复发时间为31.58个月,二者之间差异显著(P<0.05). 结论 Livin在TCCB中高表达,Livin的表达与TCCB分级、分期及是否多发无关,与TCCB复发密切相关.
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livin及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白在子宫颈鳞癌组织中的表达及意义
livin基因是Kasof和Gomes[1]发现的凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)的新成员,在恶性黑色素瘤及肾细胞癌中高表达.新研究表明,livin基因在食管癌、喉鳞状细胞癌及骨肉瘤等的发生、发展中发挥重要的作用[2-4].半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)是凋亡相关蛋白酶家族成员之一,它参与了细胞凋亡过程中的形态学与生化指标的改变,被认为是引发细胞凋亡的重要执行者.Nachmias等[5]认为,IAPs,主要通过与特异性的caspases结合,抑制caspases的活性,从而阻断细胞凋亡.本研究采用免疫组化法检测livin、caspase-3蛋白的表达,探讨其在宫颈鳞癌发生、发展中的作用.
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Livin shRNA稳定转染Hep-2细胞系的建立
目的 构建靶向Livin基因干扰真核表达质粒,建立干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞系,下调Livin基因在Hep-2细胞系中的表达.方法 针对Livin基因的mRNA序列设计干扰序列,分别构建1个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒,大肠杆菌扩增、酶切及测序鉴定,用脂质体介导转染Hep-2细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞系,用Real-time PCR和Western blot检测Livin在mRNA和蛋白水平的抑制效果.结果 经测序证实成功构建pGenesil-Livin shRNA真核表达质粒.干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞在荧光显微镜下观察,发出绿色荧光.重组质粒转染Hep-2细胞后,Livin基因在mRNA及蛋白水平明显下降,mRNA水平下调47.17％,蛋白水平下调34.25％.结论 成功构建以Livin为靶向的Livin shRNA真核表达质粒.对喉癌Hep-2细胞中Livin的表达具有显著抑制效应,为研究Livin在Hep-2中的功能和喉癌的基因治疗奠定了基础.
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慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因对大肠癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响
目的 探讨慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达,对大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长及放射敏感性的影响.方法 选取36只BALB/c(nu/nu)裸鼠,按随机区组法分为空白对照组、阴性对照组及实验组,将HT-29细胞接种于裸鼠,建立皮下移植瘤裸鼠模型,观察裸鼠体重及瘤体积的变化.RT-PCR、免疫组织化学分析Livin mRNA及蛋白表达的变化,原位末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡的变化;瘤内注射生理盐水、空载慢病毒和干扰慢病毒,同时均给予10 Gy 6MVX射线照射,绘制裸鼠体重和移植瘤生长曲线.结果 实验组体积抑瘤率为(50.04±0.07)％,瘤体重量明显减轻(F=4.85,P＜0.05),瘤重抑瘤率为(50.27 ±0.17)％.实验组Livin mRNA表达水平为(17.75±0.08)％,明显低于空白对照组的(67.60±0.05)％和阴性对照组的(68.54±0.03)％(F=89.97,P＜0.01).实验组Livin蛋白表达水平为(36.00±3.40)％,明显低于空白对照组的(85.00±3.15)％和阴性对照组的(80.33±3.08)％(F=107.32,P＜0.01).实验组凋亡率为(23.67±2.25)％,明显高于空白对照组的(5.00±1.50)％和阴性对照组的(8.33±1.82)％(F=56.94,P＜0.01).与射线联合时,裸鼠移植瘤体积在分组之间总体存在差异(F=10.70,P＜0.01),实验组肿瘤体积变化小于阴性对照组和空白对照组(F=7.01 ～9.32,P＜0.01).结论 慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达能抑制大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长,并增加移植瘤对放疗的敏感性.
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Livin基因在喉癌组织中mRNA表达及其意义
目的 探讨Livin mRNA在喉癌中的表达及意义.方法 采用RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)方法检测41例喉癌及癌旁组织、12例声带息肉新鲜标本中Livin mRNA的表达.结果 在喉癌组织标本中可检测到Livin mRNA的高表达,而在癌旁组织及声带息肉中呈低量表达,有显著性差异(P＜0.01).结论 Livin基因的表达水平上调与喉癌的发生密切相关,可能在喉癌的发生、发展中起重要作用.
关键词： 喉肿瘤 癌 鳞状上皮 livin基因 逆转录-聚合酶链反应 -
Livin基因和Survivin基因联合靶向siRNA抑制大肠癌细胞增殖的作用
采用1个载体编码2个shRNA技术,构建Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体,研究其对人大肠癌细胞生长协同抑制的增效作用.构建Livin基因和Survivin基凶联合靶向的siRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞,通过RT-PCR和Western blotting方法检测Livin基因与Survivin基因的表达,利用流式细胞仪榆测处理后细胞的凋亡效应.经酶切鉴定和测序分析证实Livin基因和Survivin基因联介靶向的siRNA重组表达载体构建成功,它对大肠癌细胞Livin和Survivin mRNA的抑制率分别为27.90%和32.24%,对Livin和Survivin蛋白表达的抑制率分别为22.28%和40.86%,诱导肿瘤细胞凋亡率为(11.69±1.37)%,但协同十扰作用比单独干扰Livin 基因或Survivin基因弱.Livin基因和Survivin基冈联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功并能抑制Livin基因和Survivin基因的表达,但协同抑制作用比单独干扰Livin基因或Survivin基因弱.
关键词： livin基因 Survivin基因 RNA干扰 基因治疗 -
抗凋亡蛋白Livin在急性白血病中的表达
目的 研究Livin在急性白血病中的表达,探讨其临床意义.方法 采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT PCR)检测40例急性白血病(AL)患者(AL组)Livin mRNA的表达水平,其中初治患者16例(初治亚组)、复发患者11例(复发亚组)、完全缓解患者13例(缓解亚组).另选10例健康人(对照组)的标本作正常对照.结果 初治亚组中Livin mRNA的表达较对照组明显升高(P＜0.05),治疗缓解后的表达水平下降(P＜0.05),复发时又再次升高;初治亚组Livin阳性的患者缓解率(14.3%)低于表达阴性的患者(77.8%)(P＜0.05).Livin mRNA的表达与AL患者性别、年龄无关(P＞0.05).结论 Livin基因的过度表达参与了AL的发病,并且是AL复发的高危因素.Livin基因的高表达是判断AL预后不良的指标之一.
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膀胱移行细胞癌组织中Livin的表达及临床意义
Livin是一种新发现的凋亡抑制蛋白(IAPs)家族成员,在大多数健康成人组织中不表达,只在胎盘、胚胎组织中表达.近年来研究发现Livin基因与肿瘤的发生、发展和预后密切相关[1].本研究通过免疫组织化学法检测Livin在膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中的表达,并探讨其与分期、分级和复发转移的关系,现报告如下.
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Livin基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其对喉癌细胞HEP-2增殖的影响
目的 构建及鉴定Livin基因siRNA慢病毒表达载体并观察其对喉癌细胞HEP-2增殖的影响. 方法 从基因库获得Livin基因序列,设计3段siRNA序列;经Mlu Ⅰ和ClaⅠ双酶切后克隆人慢病毒表达载体pLenOR-THM,构建pknOR-THM-Livin-siRNA重组质粒,将其转化感受态细菌DH5α,对阳性克隆进行筛选后,用EcoR Ⅰ和XbaⅠ双酶切及测序鉴定正确后用脂质体转染293T细胞包装病毒颗粒,感染293T细胞及HEP-2细胞,用荧光定量PCR检测其对HEP-2增殖的影响. 结果 慢病毒表达载体pLenOR-THM-Livin-siRNA被成功构建;转染293T细胞组装病毒液有绿色荧光,并主要表达在细胞膜上;浓缩后的病毒液感染293T细胞及HEP-2细胞均有绿色荧光表达.SH2-R组的Livin蛋白相对表达量低为(12.31±4.43)％;SH2-R组与SH2-F、NC组比较,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 成功构建了Livin基因siRNA慢病毒载体;HEP-2细胞Livin蛋白表达受到抑制.
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凋亡抑制基因livin在食管癌中的表达
目的:探讨凋亡抑制蛋白livin在食管癌组织中的表达及其与食管癌临床病理的相关性.方法:采用RT-PCR结合银染技术检测食管癌组织中livin-α mRNA和livin-β mRNA的表达.结果:36例食管癌组织中livin表达阳性率为50%,其表达与癌组织浸润深度和淋巴结转移有关(P＜0.05),而与癌组织分化程度无关(P＞0.05).18例癌旁正常食管组织中livin低表达,阳性率为5.6%,与食管癌组织比较差异十分显著(P＜0.01).结论:livin在食管癌组织中异常表达,有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点.
关键词： livin基因 食管癌 逆转录-聚合酶链反应 -
新发现的Livin基因在结直肠癌组织中mRNA表达及其临床意义
目的 研究Livin基因在结直肠癌组织表达及其意义.方法 采用逆转录聚合酶链式扩增反应对30例结直肠癌组织、30例癌旁正常组织及10例正常成人大肠组织中Livin mRNA的表达进行检测.结果 10例正常成人大肠组织中Livin基因均无表达.结直肠癌及癌旁正常组织Livin基因表达阳性率均为100%,但癌旁正常组织Livin基因表达量较癌组织表达量明显下降,(P＜0.05),Livin基因表达量与患者的年龄、性别、肿瘤的分期、分级差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Livin基因表达升高与结直肠癌密切相关,可能参与结直肠癌的发生.
