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新凋亡抑制因子Livin的表达及其临床意义的研究
以前,人们仅认为肿瘤是由于异常细胞过度增殖而形成的,治疗的主要手段局限以杀死肿瘤细胞为着眼点的放化疗.但经临床实践证明,肿瘤的放化疗选择性不高,毒副作用大.随着细胞凋亡的研究深入,发现肿瘤不仅是细胞增殖异常的疾病,同时也是一种凋亡异常的疾病.所以,靶向治疗是提高治疗效果的一条重要的途径,特别是基因治疗和免疫治疗.Livin是一种新近发现的细胞凋亡因子,以其为靶点的抑制物及反义Livin能够保护细胞不进行凋亡,具有广谱和低毒的副作用,为肿瘤治疗提供了新的研究方向.
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四环素调控livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响
目的:探讨四环素调控(Tet-on) livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响,以期寻找更优的肺癌干预调控系统.方法:构建Tet-on livin shRNA慢病毒载体,在裸鼠右上肢背部皮下注射肺腺癌A549株细胞建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,以Tet-on livin shRNA慢病毒载体注射瘤体干预livin表达,并以四环素腹腔注射诱导处理,了解Tet-on调控livin RNA干扰效果并观察其抑制肺癌细胞增殖情况.结果:经四环素诱导,Tet-on livin RNA组移植瘤组织中livin蛋白表达明显低于CTL组及Tet-on-NC组,且Tet-on-livin RNA组瘤体质量明显低于CTL组及Tet-on-NC组[(5.31±0.86)vs(8.22±0.63)、(7.17±0.54)g,P＜0.05];提示该调控系统可显著下调livin的表达,并抑制肺癌皮下移植瘤的生长,且该调控系统毒副作用小,未发现裸鼠死亡.结论:Tet-on livinRNA干扰系统在四环素诱导下可抑制肺癌生长,具有靶向性、可调控的特点,为以livin蛋白为靶点的肺癌靶向治疗研究提供重要的研究工具.
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RNA干扰Livin基因表达增强骨肉瘤MG-63耐药细胞对多柔比星的化疗敏感性
目的:研究凋亡抑制蛋白基因Livin在逆转骨肉瘤耐药中的作用.方法:应用多柔比星逐步诱导法诱导人骨肉瘤MG-63细胞建立耐药细胞株,MTT实验检测耐药细胞株的耐药指数,Westem blotting法检测MG-63细胞和耐药细胞中Livin蛋白表达的差异.构建Livin shRNA真核表达载体,应用LipofectmineTM 2000转染至耐药骨肉瘤细胞中,Real-time PCR和Westernblotting分别检测Livin shRNA转染前后MG-63耐药细胞中Livin基因和蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,MTT法检测对多柔比星化疗敏感性的变化.结果:成功构建重组质粒pSilencer3.1-H1 neo-Livin si.诱导的耐药细胞MG-63/R对多柔比星的耐药指数为81.32±5.33.Livin shRNA可抑制MG-63细胞中Livin基因和蛋白表达,明显低于空白对照组和非特异性转染组(分别下调72％和69％,P＜0.05).特异性转染Livin shRNA组MG-63/R细胞的凋亡率显著高于未转染组和非特异性转染组[(22.4±3.2)％vs(4.2±1.1)％、(4.7±0.6)％,P＜0.05].3组细胞在加入多柔比星后增殖均受到不同程度的抑制,且呈明显的时间-效应关系,但特异性转染组细胞的存活率均显著低于其他两组(P＜0.05).结论:应用RNA干扰技术下调Livin的基因表达可有效促进耐药MG-63骨肉瘤细胞的凋亡,从而增加其对化疗药物的敏感性.
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沉默Livin基因表达对结肠癌LoVo细胞生物学特性的影响
目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默结肠癌细胞株LoVo中Livin基因的表达,研究Livin对LoVo细胞增殖和凋亡等生物学特性的影响.方法:构建针对Livin基因的干扰质粒pSilencer4.1-L1和pSilencer4.1-L2,转染LoVo细胞,通过RT-PCR、Western blotting检测转染后LoVo细胞Livin的表达,并用流式细胞术、克隆形成实验、MTT法检测转染后LoVo细胞的凋亡、细胞周期、克隆形成、增殖以及对顺铂的敏感性.结果:成功构建pSilencer4.1-L1、pSilencer4.1-L2干扰质粒,pSilencer4.1-L1可有效沉默LoVo细胞中Livin mRNA和蛋白的表达(P＜0.01),但pSilencer4.1-L2效果不明显.与对照组相比,pSilencer4.1-L1转染后LoVo细胞的凋亡率增加[(24.2±3.2)％vs(8.1±1.4)％,P＜0.01]；细胞增殖明显抑制,转染后72 h增殖抑制率约70％；细胞的克隆形成率明显下降[(15±4.6)％vs(85±5.8)％,P＜0.01];S期细胞明显增加[(45.7±4.9)％vs(28.0±3.0)％,P＜0.01],G1期细胞明显减少[(43.0±5.2)％vs(62.8±5.1)％,P＜0.01]；对顺铂的敏感性增加,细胞凋亡率增加[(65.3±6.2)％vs(43.4±6.9)％,P＜0.01].结论:pSilencer4.1-L1可有效沉默结肠癌LoVo细胞中Livin基因的表达,抑制细胞增殖和克隆形成、诱导细胞凋亡、增加细胞对顺铂的敏感性.
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慢病毒介导shRNA特异性沉默livin基因促进SPC-A1细胞凋亡
目的:建立慢病毒介导的livin基因沉默系统,探讨其对肺癌细胞凋亡的影响.方法:Livin shRNA慢病毒感染肺腺癌细胞株SPC-A1沉默livin基因表达.应用PI染色经荧光镜下观察SPC-A1细胞凋亡形态,流式细胞术检测SPC-A1细胞凋亡率及亚二倍体峰形成,Real-time PCR及Western blotting方法检测livin和caspase 3表达的改变.结果:livin基因在肺腺癌细胞株SPC-A1中持续高表达.经慢病毒介导shRNA使livin基因表达沉默后,镜下可见肺腺癌细胞出现典型凋亡形态特征,流式细胞术检测出现亚二倍体峰,细胞凋亡率较空白对照及阴性病毒对照细胞明显增加(8.21% vs 0.08%, 0.13%;P<0.05),RT-PCR及Western blotting 检测结果显示,caspase 3 mRNA表达无改变,但cleaved-caspase 3蛋白表达上调.结论:慢病毒载体介导的shRNA能抑制肺腺癌细胞株SPC-A1中livin基因的表达,从而促进SPC-A1细胞凋亡.
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Livin异构体特异性shRNA对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响
目的:应用构建成功的Livin异构体(BIRC71,BIRC72)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体转染Hela细胞,探讨其对Livin基因的沉默效应及诱导Hela细胞凋亡的作用.方法:采用脂质体转染法转染Hela细胞,荧光实时定量PCR、Western blotting检测转染前后宫颈癌Hela细胞Livin基因拷贝数和蛋白表达的变化,将shRNA表达载体流式细胞术检测不同时间(24、48、72 h)的细胞凋亡率.结果:真核表达载体的转染效率48 h较24、72 h高;转染pGenesil-1-BIRC71、pGenesil-1-BIRC72后Hela细胞中Livin拷贝数明显减少(P<0.05),蛋白质表达水平显著降低(P<0.05);流式细胞术检测24、48、72 h凋亡率,转染Livin shRNA组细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.05),随时间延长(24→72 h)凋亡率相应增加.结论:靶向Livin的shRNA真核表达载体可以有效特异地阻断Livin基因的表达,明显诱导宫颈癌细胞凋亡.
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livin基因在卵巢癌细胞中的表达及其意义
目的 探讨凋亡抑制基因livin在卵巢癌细胞中的表达及其生物学意义.方法 收集32例卵巢癌患者癌组织及相应的癌旁组织、细胞培养卵巢癌细胞系A2780,用实时荧光定量PCR和western blot分别检测组织中livin基因的mRNA和蛋白质表达;MTT法检测A2780细胞的生长率;流式细胞术检测A2780细胞的凋亡率.结果 livin mRNA和蛋白质表达在卵巢癌组织中明显高于癌旁组织(t=6.98,P<0.01;t=5.12,P<0.01);与对照组相比,转染livin siRNA组卵巢癌细胞的生长率显著减少(χ<'2>=77.21,P<0.01),细胞凋亡率呈明显增高(χ<'2>=15.68,P<0.01).结果 livin在卵巢癌的发生、发展中起重要的作用,可能成为卵巢癌治疗的新分子靶点.
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前列腺癌组织中凋亡抑制基因Livin的表达研究
目的:探讨前列腺癌组织中凋亡抑制基因Livin的表达及其与临床病理特征的关系.方法:应用RTPCR和免疫组化(SP)法,检测Livin在62例PCa组织中的表达情况,其中高分化癌14例,中分化癌30例,低分化癌18例,正常前列腺组织10例.结果:62例PCa组织中Livin基因高表达,正常的前列腺组织中Livin均无明显表达.62例PCa组织中Livin蛋白阳性表达共有37例(59.7%),低分化组Livin蛋白阳性表达率(83.3%)明显高于高分化组(28.6%),其差异有统计学意义(P＜0.05),中、高分化组间及低、中分化组间Livin蛋白阳性表达率无统计学差异(P＞0.05).Livin蛋白阳性表达与PCa的临床分期比较,T1～T2 65.0%,T3～T477.3%,亦有统计学意义(P＜0.05),临床分期愈晚,Livin蛋白阳性表达率愈高.结论:Livin与PCa的发生、发展有关,检测PCa组织中Livin表达可能对判断PCa预后有一定意义.
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Livin基因在非小细胞肺癌中表达的分子生物学特性
原癌基因和抑癌基因所编码的蛋白存在于细胞的各个组成部分中,包括细胞核、细胞质、线粒体和细胞膜.通过对原癌和抑癌基因蛋白结构和功能的分析,发现许多原癌基因和抑癌基因位于信号通路中的不同部位,参与许多重要的细胞活动过程,如细胞生长和分化、DNA复制和损伤修复、基因转录和表达、细胞周期调控等,在细胞凋亡、衰老过程中起重要作用,也在肿瘤的发生发展和转移中扮演重要角色.
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两种铂类药物对人胃癌细胞Livin基因表达的影响
目的:研究奥沙利铂(L-OHP)或顺铂(CDDP)对人胃癌细胞株BGC-823生长的抑制作用以及Livin基因表达的变化.方法:应用MTT比色法检测细胞24、48、72 h的增殖抑制率,选择3个时间段的不同浓度(IC10、IC30、IC50)铂类药物作用于BGC-823细胞,RT-PCR法检测Livin基因表达,Western-blots法检测Livin蛋白表达量.结果:两种铂类药物作用后,BGC-823的增殖受到抑制,呈时间和剂量依赖性,L-OHP的量效变化更明显.两种铂类药物早期均可抑制Livin表达,CDDP作用细胞72 h后Livin表达量开始增加,而L-OHP组仍呈下降趋势.结论:L-OHP是Livin的潜在抑制剂,其对BGC-823的增殖抑制量效变化比CDDP更明显,两者对Livin表达的不同影响将为探讨Livin的调控机制和功能研究提供一定依据.
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凋亡抑制蛋白Livin在胃癌中的表达及意义
人类凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAPs)是一类重要的抗细胞凋亡因子,其在细胞的凋亡和肿瘤的发生发展过程中有重要影响.Livin是2000年发现的IAPs的新成员,特异性地表达于人的胚胎组织及人体实体瘤细胞和组织中[1].目前Livin在胃癌中的表达情况报告还较少[2,3].为探讨Livin在胃癌发生发展中的作用,笔者检测了60例胃癌组织中Livin基因的表达情况.
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Livin基因在恶性肿瘤诊断和治疗中的研究进展
Livin作为凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)的成员之一,表达于多种恶性肿瘤细胞中,而且其过表达可增加恶性肿瘤细胞的抗凋亡作用及对放疗化疗的耐受性.
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Livin shRNA 表达载体的构建及在胰腺癌细胞的效应研究
目的：构建Livin shRNA真核表达载体，探讨干扰质粒稳定转染的胰腺癌panc-1细胞系效应。方法合成Livin基因干扰序列并定向插入到RNA干扰（RNAi）真核表达载体pGCsilencerTM U6/Neo/GFP/RNAi质粒，通过测序进行鉴定。干扰质粒经脂质体Lipofectamine 2000介导转染panc-1细胞。经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。定量RT- PCR检测所筛选克隆Livin mRNA的转录水平，采用western blot验证Livin蛋白表达水平改变。结果测序证明Livin干扰序列及读码框正确，干扰质粒稳定转染的panc-1细胞在倒置荧光显微镜下呈明亮绿色荧光，定量RT- PCR和western blot检测结果显示Livin shRNA序列对胰腺癌细胞系Livin mRNA及蛋白表达均有抑制作用。结论成功构建Livin shRNA真核表达载体，建立Livin shRNA质粒稳定转染的panc-1细胞系可为进一步研究Livin在胰腺癌细胞中的作用奠定基础。
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Livin基因在肺癌中的研究进展
Livin基因是近年发现的一种新的凋亡抑制蛋白(IAPs)家族成员.由于其首先在黑色素瘤中被发现,故也称为ML-IAP;而且也是通过IAP同源序列从人类肾基因组cDNA文库中筛选克隆获得,故又称为KIAP.Livin在大多数正常成人组织中并不表达,但在某些肿瘤组织和细胞中却高表达.目前,关于Livin与肺癌的关系已越来越受关注,以Livin为基础的各种手段有可能成为肺癌早期诊断和药物靶向治疗的新方法.本文现就Livin基因在肺癌中的研究进展综述如下.
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乳腺癌中Livin基因及蛋白表达与细胞凋亡、增殖的关系
目的 探讨Livin在乳腺癌表达及其与caspase-3蛋白表达和细胞增殖的相互关系.方法 采用SP法免疫组化和原位杂交技术检测Livin在正常乳腺组织(14例)、乳腺增生性病变(14例)、乳腺非浸润性癌(20例)和乳腺浸润性癌组织(52例)中Livin mRNA和其蛋白的表达以及caspase-3、Ki-67在乳腺癌组织中的表达.结果 Livin蛋白和mRNA在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌组织中阳性率分别为(7.1%、7.1%)、(28.6%、28.6%)、(65.0%、70.0%)、(73.1%、75.0%),差异有统计学意义(P＜0.01).Livin蛋白与mRNA表达之间差异无统计学意义(P＞0.05).Livin表达与临床分期、淋巴结转移和年龄有关(P＜0.05),与肿瘤大小和组织学分级无关.Livin蛋白与caspase-3的在乳腺癌表达呈负相关(P＜0.01).Livin蛋白表达阳性的乳腺癌Ki-67增殖指数(47.32%±22.34%)明显高于Livin蛋白表达阴性的乳腺癌Ki-67增殖指数(18.01%±23.34%)(P＜0.01).结论 Livin基因及蛋白在乳腺癌中表达上调,提示在乳腺癌发生、发展中起重要作用,可作为乳腺癌新的分子标记物,可能成为乳腺癌诱导凋亡治疗的新靶点.Livin蛋白通过与执行型caspase-3结合,抑制其活性,从而阻止细胞凋亡.Livin不仅参与细胞凋亡的调控,还促进了细胞增殖及肿瘤的发生、发展.
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Livin 和 PTEN 基因在喉鳞状细胞癌中的表达及其相关性的研究
目的：探讨livin和PTEN基因在喉鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织中的表达及其相关性。方法应用免疫组化Elvsion法，检测62例喉癌组织和18例癌旁喉组织（癌旁1．0～2．0 cm正常喉组织）中livin和PTEN蛋白的表达情况。结果 livin基因在癌组织中呈高表达（72．58％），在癌旁组织中不表达或呈低表达。 PTEN则反之，在癌旁组织中表达率为59．70％。结论 livin基因表达或PTEN基因缺失表达，在喉鳞状细胞癌的发生发展中起重要作用。
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急性早幼粒细胞性白血病患者Livin、PTEN基因的表达及其意义
目的：探讨Livin、PTEN基因在急性早幼粒细胞性白血病患者中的表达及其临床意义。方法：采用PCR方法检测急性早幼粒细胞性白血病患者的Livin、PTEN基因表达情况，并与缺铁性贫血患者相比较。结果：30例AML-M3患者当中Livin基因的阳性率为63.3%（19/30），对照组为15.0%（3/20）。AML-M3患者当中PTEN基因的阳性率为43.3%（13/30），对照组为85.0%（17/20），与对照组相比较，AML-M3的Livin和PTEN基因表达异常有显著意义（P<0.01）。结论：Livin、PTEN基因在AML-M3呈异常表达，对疾病的发生发展有重要作用，Livin和PTEN有可能成为AML-M3重要诊断指标和基因治疗靶点。
关键词： livin基因 PTEN基因 急性早幼粒细胞性白血病 -
Livin基因和vimentin蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达与临床意义
研究Livin基因和vimentin蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达与临床意义.共纳入50例PTC、50例甲状腺瘤和50例甲状腺单纯结节患者,采用RT-PCR法检测组织中Livin基因mRNA相对表达水平,Western blot法检测vimentin蛋白相对表达水平.PTC组Livin基因mRNA和vimentin蛋白的相对表达水平均显著高于其他两组,差异有统计学意义(P＜0.05);而其他两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).PTC组织中Livin基因和vimentin蛋白表达水平与肿瘤大径、TNM分期、颈部淋巴结转移有关(P＜0.05);与患者性别和年龄无关(P＞0.05).Livin基因和vimentin蛋白可能参与了PTC的增殖、侵袭和转移过程,可能成为早期诊断和干预的重要靶点.
关键词： 甲状腺乳头状癌 livin基因 vimentin蛋白 -
Livin shRNA真核表达载体构建及其对HepG2细胞化疗敏感性的影响
目的 构建针对Livin基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,探讨其对肝肿瘤HepG2细胞化疗敏感性的影响.方法 设计并构建针对Livin基因的shRNA真核表达载体pSD11-U6/Neo/GFP/Livin,脂质体法转染肝肿瘤HepG2细胞.荧光定量PCR、Western blotting检测细胞LivinmRNA和蛋白的相对表达水平.顺铂(2.0 mg/L)处理后,MTT法检测细胞生长抑制率.结果 测序分析证实针对Livin基因的shRNA真核表达载体构建成功,转染肝肿瘤HepG2细胞后可降低Livin mRNA和蛋白的相对表达量(P＜0.05),顺铂对转染Livin表达载体的HepG2细胞抑制率明显高于未转染细胞(P＜0.05).结论 成功构建Livin shRNA真核表达载体,且有效抑制HepG2细胞中Livin基因的表达,增强肝肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.
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靶向抑制Livin表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响
目的 观察靶向抑制Livin表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法 取人子宫内膜癌Ishikawa细胞,将细胞分为Livin-Si组、Livin-NC组和空白对照组.设计合成Livin的特异性小分子干扰RNA(Livin-siRNA)和阴性对照序列(Livin-NC),Livin-Si组、Livin-NC组分别采用脂质体法瞬时转染Livin-siRNA干扰序列、Livin-NC阴性对照序列,空白对照组加入10％FBS.转染后48 h,实时荧光定量PCR法检测Livin mRNA表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞侵袭及迁移能力.结果 Livin-Si组Livin mRNA相对表达量较Livin-NC组、空白对照组减少(P均<0.01).Livin-Si组细胞增殖OD值低于Livin-NC组和空白对照组(P均<0.01).与Livin-NC组、空白对照组比较,Livin-Si组穿膜细胞数均减少(P均﹤0.01).结论 抑制Livin在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,可抑制细胞的增殖,减弱细胞的侵袭及迁移能力.
