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肉瘤S180鸡胚尿囊膜移植瘤模型建立及生物学特性研究
目的:建立肉瘤S180鸡胚尿囊膜(CAM)移植瘤模型,研究其形态学及生物学特性.方法:在无菌条件下将肉瘤S180肿瘤细胞接种于CAM上,观察影响肉瘤S180移植瘤成活的因素、移植瘤生长特性、生物学性状和形态学特征.结果:建立了肉瘤S180 CAM移植瘤模型.移植瘤易于生长,成瘤率较高,具有较强的血管生成诱导作用.当接种肉瘤S180肿瘤细胞为5×107个/枚时,成瘤率达到83.33%,且与第1天比较,诱导血管数从第2天开始就呈统计学差异P＜0.05,当移植第4天时就呈极显著性差异P＜0.001.结论:该模型具有易于复制、操作简单、适用范围广等特点,可应用于肿瘤血管生成的生物学行为研究,为抗血管生成抗肿瘤药物的筛选提供了更为直观的平台.
关键词： 肉瘤S180 鸡胚尿囊膜(CAM) 移植瘤 成瘤率 -
NHE1基因调控细胞内酸碱平衡对胃癌细胞生物学行为的影响
目的:通过基因转染技术,研究NHE1反义基因对SGC-7901胃癌细胞生物学行为的影响,探讨通过酸化细胞内环境诱导肿瘤细胞凋亡从而治疗胃癌的新方法.方法:利用亚克隆技术构建人NHE1反义结构基因哺乳动物真核表达质粒,通过DOTAP脂质体介导的转染技术将反义真核表达质粒和空载体分别转入SGC-7901胃癌细胞中,经聚合酶链反应(PCR)对转染基因的整合鉴定后,观察基因转染对细胞形态学、细胞内pH值、体外生长状况、细胞周期以及双层软琼脂克隆形成能力和裸鼠成瘤力的影响.结果:光镜及透射电镜下细胞形态恶性程度降低.Anti-7901细胞胞内pH值显著低于Zeo-7901细胞和空白对照组SGC-7901细胞内pH值(6.77±0.05 vs 7.24±0.03,7.26±0.03,P＜0.01).Anti-7901细胞生长速度明显减慢,出现接触抑制,呈单层生长,细胞凋亡率显著高于Zeo-7901细胞和空白对照组SGC-7901凋亡率(26.1% vs 5.12%,4.48%,P＜0.01).Anti-7901细胞在双层软琼脂中集落形成率显著低于Zeo-7901和空白对照组SGC-7901细胞(9±3.54‰ vs 40±4.53‰,38.6±4.63‰,P＜0.01).接种Zeo-7901细胞和空白对照组SGC-7901细胞裸鼠皮下长出肿瘤,成瘤率为100%,而接种Anti-7901细胞裸鼠皮下未长出肿瘤,成瘤率为0%.结论:反义技术干预可使NHE1基因表达下调,导致细胞内酸化,诱导细胞凋亡,达到了有效治疗胃癌的目的,为胃癌基因治疗提供了新的思路.
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颌面部VX2肿瘤动物模型的建立及其磁共振表现
采用兔颌面部局部皮下和肌肉内注射瘤细胞两种方法建立兔颌面部VX2肿瘤动物模型,并运用MRI监测动物模型的成瘤率和肿瘤生长特性,为颌面部肿瘤的研究提供可靠的基础.
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SCID小鼠和BALB/c裸鼠对两株人体肿瘤细胞系移植敏感性的研究
本文用MDA-MB231乳腺癌细胞致瘤块和人肺腺癌1Ax-83细胞系,在严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠、BALB/c裸鼠的乳房垫和腋背侧皮下移植.结果表明,SCID小鼠对两株人体肿瘤细胞系成瘤率为100%(21/21)高于BALB/c裸鼠57.1%(8/14),两者差异显著( P＜0.05),SCID小鼠比BALB/c裸鼠潜伏期明显缩短、且肿瘤生长较快.MDA-MB-231乳腺癌细胞致瘤块移植组,SCID小鼠乳房垫接种者肺转移100%(5/5)、淋巴结转移20%(1/5),腋背侧皮下移植肺转移50%(2/4)、淋巴结未见转移(0/4);而BALB/c裸鼠乳房垫接种者未见转移( 0/4),腋背侧皮下接种者仅20%(1/5)有肺转移.人肺腺癌1Ax-83细胞系移植组SCID鼠无自然消退,而BALB/c裸鼠消退率50%(1/2).结论:SCID小鼠比BALB/c裸鼠更适宜做某些肿瘤移植模型,尤其是乳腺癌原位移植动物模型.
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人源性乳腺移植模型:有效提高人源性乳腺癌细胞株在小鼠原位成瘤率的途径
目的:探索解决部分人乳腺癌细胞株在小鼠模型中成瘤率过低问题,以稳定提高乳腺癌小鼠模型的成瘤效率.方法:在雌性重症联合免疫缺陷症(severe combined immunodeficiency, SCID)小鼠的一侧胁腹皮下移植人源性正常乳腺组织,向移植组织内注射绿色荧光蛋白(GFP)标记的人乳腺癌细胞株MCF-7;同时以传统的小鼠乳腺脂肪垫(MFP)注射模型作为对照,即在雌性SCID小鼠一侧腹股沟MFP内注射同等数量GFP标记的MCF-7.从活体动物荧光成像仪和病理检测两个水平评估移植模型和MFP注射模型的原位成瘤率.结果:人源性乳腺移植小鼠模型的原位成瘤率在大体荧光观察下为95%(19/20例),在病理检测中为100%(20/20例);MFP注射模型的原位成瘤率在大体荧光观察下为0(0/20例),在病理检测中为15%(3/20例).人源性乳腺移植模型在大体(P<0.05)和镜下(P<0.05)两个水平的成瘤率都远高于传统的MFP注射模型.结论:人源性乳腺移植模型可显著提高人乳腺癌细胞株在小鼠模型上的原位成瘤率.
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提高人胃腺癌组织裸小鼠移植瘤成功率的几种方法选择
采用2周龄强制断奶和3周龄自然断奶的2组裸鼠用皮下塞入法将手术切除的人肿瘤组织(肿瘤表面组织和深部组织)作异体移植,并将已长成的人肿瘤的异体瘤切除以残瘤的形式继续在裸鼠皮下增殖,观察移植瘤在不同周龄的裸鼠以及肿瘤组织取材差异的成瘤影响和残瘤的生长特性.结果表明,2周龄裸鼠移植瘤的成瘤性较3周龄裸鼠为优,在相同移植天数,2周龄的成瘤期比3周龄的裸鼠提前了约4 d,成瘤率也提高了一倍以上(P《0.01).移植时取肿瘤表面组织比肿瘤深部组织的成瘤率提高3倍以上(P《0.005).残瘤的传代率100%,且成瘤期只有8 d.结果提示,使用2周龄的裸小鼠可提高移植瘤的成瘤率,如接种时选择肿瘤表面组织更可提高移植瘤的成瘤率.在移植瘤成瘤后用残瘤的方式传代时,可使成瘤期提前.
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裸鼠视网膜下注射HXO-Rb44细胞建立视网膜母细胞瘤动物模型
目的 建立一种生物学行为更接近临床的视网膜母细胞瘤(Rb)动物模型.方法 Rb细胞取HXO-Rb44细胞系,培养于含质量分数10%胎牛血清的改良型RPMI-1640培养基内,细胞悬液密度调至(5.0～6.0)×106/mL备用.30只裸鼠,分为视网膜下组和玻璃体腔组,每组各15只鼠30只眼.2组注射HXO-Rb44细胞悬液后每天裂隙灯下观察裸鼠眼内Rb肿物生长情况,并于注射后21、28、35、42d,根据组织病理学检查统计成瘤情况,比较2组成瘤率.行Rb特异性标志神经元特异性烯醇酶(NSE)及酸性钙结合蛋白(S100)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学检测.结果 视网膜下组和玻璃体腔组在注射后均观察到肿瘤在裸鼠眼内生长并逐渐增大.注射后21、28、35、42d,视网膜下组成瘤率高于玻璃体腔组,差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学染色提示,Rb细胞质NSE表达较强,S100表达较弱,GFAP表达弱.结论 在同等条件下建立Rb动物模型,视网膜下注射的成瘤率高于玻璃体腔内注射者,且视网膜下注射建立的是原位肿瘤模型,生物学行为更接近临床.
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兔眼前房视网膜母细胞瘤动物模型的建立
目的 建立一种稳定的视网膜母细胞瘤(Rb)动物模型.方法 38只新西兰大白兔,根据兔眼前房Rb细胞注入量及免疫抑制因素随机分为10组,除正常组(A组)2只(4只眼)外,其余B～J 9组每组各4只(8只眼),兔眼前房注入Rb细胞后每天观察兔眼前房内Rb肿物的生长情况,30 d后处死动物,行组织病理学及免疫组织化学检查,并分析其成瘤率及维持时间等.结果 C、D、F、G、H、I、J组动物前房内均有不同程度的Rb肿物生长,成瘤率为100%;C组与D、F、G组3组和H、I、J组3组之间前房维持时间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).Rb胞浆神经元特异性烯醇酶(NSE)表达较强,S100表达较弱.结论 兔眼前房内注入Rb细胞的密度大于4×107个/mL时会有不同程度的肿物生长;单独应用环孢素A(CsA)滴眼液、环磷酰胺(CTX),或二者联合应用,均能使兔眼前房内肿物在30 d内稳定生长.
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X线放射后BALB/c小鼠mCD99L2-A20细胞成瘤率及外周血T淋巴细胞亚群变化
目的 探讨X线放射对BALB/c小鼠外周血T淋巴细胞亚群及mCD99L2-A20细胞成瘤率的影响.方法 40只BALB/c小鼠随机分为放射组和对照组,每组20只.放射组小鼠接受X线放射处理,对照组小鼠不接受X线放射处理.2组小鼠每只皮下注射接种mCD99L2-A20细胞悬液100 μL(1×107个细胞),观察2组小鼠的成瘤情况;分别选择对照组、放射组接种mCD99L2-A20后成瘤及未成瘤小鼠各5只,于接种后20 d抽取小鼠外周静脉血,应用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群水平.结果 放射组小鼠成瘤13只(放射后成瘤组),未成瘤7只(放射后未成瘤组),成瘤率为65.0％;对照组小鼠成瘤1只,未成瘤19只,成瘤率为5.0％;放射组小鼠成瘤率显著高于对照组(x2=15.824,P=0.000).对照组、放射后未成瘤组和放射后成瘤组小鼠外周血CD3+、CD4+水平比较差异均无统计学意义(F=2.857、2.755,P=0.116、0.104),但3组小鼠外周血CD8+水平比较差异有统计学意义(F=65.087,P=0.000).放射后未成瘤组和放射后成瘤组小鼠外周血CD8+水平显著低于对照组(t=6.166、12.982,P=0.000),放射后成瘤组小鼠外周血CD8+水平显著低于放射后未成瘤组(t=4.597,P=0.002).结论 X线放射后BALB/c小鼠接种mCD99L2-A20细胞成瘤率提高,其机制可能与机体免疫功能抑制及细胞毒性T细胞减少有关.
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去甲基化Runx3基因对荷人胃癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用
Runx3基因作为转化生长因子(TGF-β)信号传导通路中的一个重要因素参与对上皮细胞的负向调控.在众多的肿瘤中均发现了染色体1p36的异常[1],而其中Runx3甲基化对胃癌的发生发展的影响越来越受到广泛关注.为进一步明确Runx3基因甲基化在胃癌发生、发展中的作用,本研究运用5-aza-2'-deoxycytidine药物处理胃癌细胞株达到去甲基化效果并接种于BALB/c裸鼠观察成瘤率和肿瘤体积,从而深入探讨Runx3基因在胃癌中的表达情况及其临床意义.
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兔VX2肺癌模型的建立及生物学特性观察
我们用3种方法将VX2鳞状细胞癌组织块原位移植于兔肺部,比较各种方法的原位成瘤率及优缺点,以寻求一种原位成瘤率高,类似于人肺部肿瘤的原位移植肿瘤模型.
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肺癌人源性异种移植小鼠模型库的建立
目的 建立肺癌人源性异种移植(PDX)小鼠模型,并对形成的PDX肿瘤与原代患者肿瘤生物学一致性进行比较,同时分析影响PDX肿瘤形成的关键因素.方法 通过手术或活检取临床肺癌患者的新鲜组织,接种于免疫缺陷小鼠NOD-Prkdcnull-Il2rgnull(NPITM)皮下以建立肺癌PDX模型.通过苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学法检测传代肿瘤病理分型与肿瘤标志物表达与原代肿瘤的一致性,并结合临床患者相应肿瘤特征数据,综合分析影响PDX模型成瘤的关键因素.结果 通过对195例肺癌患者样本进行PDX肿瘤模型的构建,经过传代及病理诊断确认成功构建59例肺癌PDX模型.综合肺癌PDX模型构建成瘤率为29.65％.已成瘤的肺癌PDX模型各代次肿瘤样本的病理结构与相应原代肿瘤一致.影响肿瘤成瘤率及成瘤时间的主要因素为原代肿瘤的病理分型(P＜0.05),腺癌的成瘤率为14.75％,鳞癌的成瘤率为56.60％.结论 成功建立了肺癌PDX小鼠模型,其保持了原代肿瘤的生物学特点.
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RNAi技术抑制乳腺癌细胞表皮生长因子受体表达的在体实验研究
目的 探讨采用体外化学合成的小干扰RNA(siRNA)结合阳离子脂质体是否能有效在体转染乳腺癌细胞,以期为RNAi的在体实验研究提供实验数据和理论依据.方法 (1)建立裸鼠肿瘤动物模型,计算成瘤率.(2)体外转染乳腺癌细胞,常规动物接种,测量肿瘤体积和动物重量,计算肿瘤抑制率.(3)采用免疫组化和Western blotting技术测定肿瘤组织的表皮生长因子受体蛋白水平,采用Real-time PCR检测表皮生长因子受体基因水平,采用ELISA检测动物血清及肿瘤抽提蛋白中EGF含量.结果 MDA-MB-231、ZR-75细胞成瘤率依次为30.00%、88.89%,MDA-MB-231细胞的成瘤能力明显弱于ZR-75细胞.ELISA检测结果证实dsRNA-表皮生长因子受体可将血清及肿瘤组织抽提蛋白中的EGF含量分别降低16.77%、12.59%.Real-time PCR结果表明dsRNA-表皮生长因子受体可将表皮生长因子受体基因表达下调21.05%.结论 (1)采用体外化学合成的siRNA结合阳离子脂质体可有效在体转染乳腺癌细胞.(2)在体实验中RNAi效应持续的时间明显长于体外实验.(3)针对表皮生长因子受体基因序列设计的siRNA可作为极具开发前途的抗肿瘤新药,其在体实验中触发RNAi可能的作用机制尚需进一步深入探讨.
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经腹腔注射地塞米松和与环磷酰胺建立昆明种小鼠胃癌模型的比较
目的 观察经腹腔注射地塞米松(DEX)与环磷酰胺(CTX)两种不同药物对小鼠免疫抑制的作用及成瘤率的比较,为小鼠胃癌模型的建立提供实验依据.方法 将昆明小鼠随机分为空白对照组、地塞米松组及环磷酰胺组,每组小鼠各20只,雌雄各半,分别经腹腔注射给予0.9％生理盐水、DEX、CTX连续7d.后将SGC-7901人胃癌细胞悬液经腹腔注射在CTX组及DEX组小鼠体内,观察10d,结束实验.流式细胞仪检测其CD3+、CD4+、CD8+数值变化,ELISA检测IL-4,CCK-8法检测脾脏细胞活性.结果 1)与空白对照组相比,免疫抑制组(CTX组和DEX组)血清IL-4含量、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值及脾细胞转化吸光度差值明显降低(P＜ 0.05);CTX组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值、脾细胞转化吸光度、血清IL-4含量差值比DEX组下降明显,差异有统计学意义(P＜0.05).2)CTX组(73.68％)较DEX组(40％)小鼠成瘤率高,差异有统计学意义(x2=22.718,P＜0.01).结论 通过接种肿瘤细胞,在昆明种SPF级小鼠上成功构建了SGC-7901人胃癌细胞肿瘤模型,对成瘤小鼠相关细胞因子进行检测分析,由环磷酰胺预处理后引起的小鼠免疫抑制成瘤率相比地塞米松导致小鼠免疫抑制成瘤率较高(P＜0.05),说明环磷酰胺在免疫抑制后小鼠经腹腔注射成瘤率方面较地塞米松有一定优势.
