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凉血愈肠汤对大鼠放射性肠炎肠黏膜的修复机制
目的 探讨凉血愈肠汤灌胃治疗大鼠放射性肠炎的作用机制.方法 随机数字表法将60只雄性SD大鼠分为3组,正常对照组、蒸馏水组(10 Gy剂量照射后给予蒸馏水灌胃)和凉血愈肠汤组(10 Gy剂量照射后给予凉血愈肠汤灌胃),每组20只.连续7d分别给予照射后的大鼠蒸馏水和凉血愈肠汤灌胃,在实验结束前经腹腔注入5-溴脱氧尿苷(BrdU),采用SP方法及光镜观察肠腺上皮细胞增殖核抗原(PCNA)、Ki67和BrdU标记阳性细胞.结果 凉血愈肠汤组大鼠的肠上皮细胞PCNA、Ki67和BrdU标记阳性细胞数(22.0±2.7、71.2±5.7、26.2±5.9)显著多于蒸馏水组模型大鼠(11.2±1.9、61.6±5.5、11.3±2.2)(t=14.629、5.420、11.582,P＜0.05),少于正常对照组大鼠(30.4±5.7、86.6±5.1、32.3±3.2)(t=14.291、9.004、4.731,P＜0.05).结论 凉血愈肠汤可促进急性放射性肠炎大鼠肠上皮细胞的增殖.
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小鼠DC、NK细胞体外诱导、增殖及示踪方法
目的研究小鼠自然杀伤(NK)细胞、树突状细胞(DC)体外诱导增殖及其过继免疫后示踪的方法.方法建立C57BL/6小鼠皮下黑素瘤模型,体外诱导、增殖小鼠脾源性NK细胞及骨髓源性DC,进行电镜观察,并在体外以Brdu、DAPI标记,混合两种细胞回输荷瘤小鼠体内,观察肿瘤组织中两种细胞的示踪情况.结果DC、NK细胞在细胞因子诱导下体外成倍扩增,电镜下可见典型的DC、NK细胞.Brdu对细胞的标记率约65%,DAPI对细胞的标记率可达100%.在荧光显微镜下可见肿瘤组织切片中外源性DC、NK细胞的分布.结论Brdu、DAPI均可作为外源性细胞体内示踪的标记方法.
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乌灵胶囊增加慢性不可预见性温和应激大鼠海马连接蛋白43的表达改善神经再生
目的:探讨乌灵胶囊对慢性不可预见性温和应激(chronic unpredietable mild stress,CMS)抑郁模型大鼠海马齿状回脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经再生,以及连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响.Correspondence: Prof. Wei Cai; Tel: 0571-56723002; E-mail: caiw236@yahoo.com.cn方法:45只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分入对照组(n=15)、模型组(n=15)和乌灵胶囊组(n=15).模型组和乌灵胶囊组大鼠接受连续3周的CMS,造模期间,乌灵胶囊按100 mg/(kg·d)加入乌灵胶囊组大鼠的膳食中,连续治疗21 d.采用糖水偏爱实验评价大鼠的抑郁程度.抑郁行为测试结束后,取双侧海马组织,用免疫组织化学法检测BDNF与5-溴脱氧尿苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)的表达;用逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹法检测海马中Cx43 mRNA与蛋白表达.结果:慢性应激大鼠齿状回BDNF阳性表达、新生细胞数及Cx43 mRNA和蛋白表达水平均较正常大鼠明显下降.乌灵胶囊治疗后,CMS大鼠抑郁行为得到改善,异常的海马神经再生恢复,Cx43 mRNA和蛋白表达变得正常,但BDNF表达无明显改变.结论:乌灵胶囊可增加CMS模型大鼠海马神经再生及改善抑郁症状,其机制可能与增加Cx43表达有关,与BDNF无关.
关键词： 慢性不可预见性温和应激 脑源性神经营养因子 5-溴脱氧尿苷 连接蛋白 大鼠 -
头针对急性脑缺血再灌注大鼠BrdU/nestin表达的实验研究
目的 观察头针对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠BrdU/nestin表达的影响,探讨头针治疗脑缺血的可能机制.方法 将90只健康雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和头针组,各组再根据缺血再灌注时间的不同,随机分为7d、14d、28d共9个亚组.采用大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型,选取顶颞后斜线、顶颞前斜线,进针后接韩氏穴位神经刺激仪,每天治疗1次.对大鼠应用神经功能缺损评分(NSS),免疫荧光检测法观察脑缺血再灌注各时间点大鼠海马齿状回BrdU及BrdU/nestin含量.结果 头针组与模型组各时相NSS组间比较,头针组显著低于模型组(P＜0.05,P＜0.01).脑缺血再灌注侧海马齿状回BrdU的表达:模型组与假手术组比较均有显著性差异(P＜0.01),头针组在各时间点上与模型组比较,均显著性升高(P＜0.01),7d达到峰值,14 d开始下降.脑缺血再灌注侧海马齿状回BrdU/nestin的表达:模型组与假手术组比较均有显著性差异(P＜0.01),头针组在各时间点上与模型组比较,均显著性升高(P＜0.05),以7d为明显(P＜0.01).结论 头针可明显改善大鼠神经功能缺损状态,促进神经干细胞得再生,通过增加nestin的含量来促进急性脑缺血再灌注损伤过程中神经干细胞的修复,实现对缺血脑组织保护的目的.
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CDK抑制剂olomoucine对星形胶质细胞增殖活化的影响
目的观察体外培养的星形胶质细胞(astrocyte, AS)对物理损伤的反应,探讨细胞周期调控对AS活化及增殖的影响.方法建立体外培养大鼠纯化的AS机械损伤模型,利用免疫细胞化学方法观察损伤区的细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、5-溴脱氧尿苷(BrdU)的动态变化;以及周期素依赖的蛋白激酶(CDK)选择性抑制剂olomoucine干预后PCNA、BrdU表达的变化.结果物理损伤后24 h,损伤边缘区AS明显活化,细胞数目增加、胞体肥大,且交织成网状; PCNA表达增强, BrdU阳性细胞比率增加,大量AS进入增殖期.特异性细胞周期抑制剂olomoucine干预后,AS的 PCNA表达增强被抑制,胞体肥大程度减轻,BrdU阳性细胞比率减少.结论损伤刺激可促使胶质细胞细胞周期(cell cycle)启动、反应性增殖活化; olomoucine可以通过抑制CDK调控反应性AS的肥大、增殖.
关键词： 星形胶质细胞 细胞周期 Olomoucine 增殖细胞核抗原 5-溴脱氧尿苷 -
哮喘大鼠气道细胞DNA合成和气道重塑关系的实验研究
目的研究哮喘动物气道细胞的DNA合成和气道重塑以及二者之间的关系.方法建立大鼠哮喘模型,采用双标免疫组化技术和计算机图像分析系统对气道细胞的DNA合成和气道重塑进行研究.结果(1)哮喘组气道平滑肌细胞和上皮细胞的DNA合成BrdU阳性计数明显高于对照组(P＜0.01,P＜0.05);(2)哮喘组气道平滑肌细胞和上皮细胞DNA合成Brdu阳性计数和气道直径呈高度正相关(P＜0.01,P＜0.05),对照组无明显相关性(P＞0.05,P＞0.05);(3)哮喘组气道上皮层厚度明显大于对照组(P＜0.01),平滑肌层厚度、气道直径和α-平滑肌肌动蛋白阳性区面积和对照组无显著性差异(P＞0.05).结论变态反应性炎症所导致的气道细胞DNA合成增加以及细胞增生,可能是引起气道重塑反应发生的重要原因.
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局灶性脑缺血再灌注大鼠Nestin的表达
目的了解局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中Nestin的表达特点.方法采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)2 h后不同再灌注时间段(6 h、12 h、24 h、72 h、7 d、14 d)的大鼠局灶性脑缺血模型,应用免疫组织化学技术检测Nestin的表达.结果脑缺血再灌注后6 h,Nestin+表达即有增加,至3 d时Nestin+表达显著增强,Brdu+/Nestin+细胞也已明显可见,至7 d时Nestin+表达、Brdu+/Nestin+细胞数目均达顶峰,至再灌注14 d Nestin+表达及Brdu+/Nestin+细胞数目均已明显回落.结论脑缺血可引发大鼠Nestin的表达上调,并可诱导神经干细胞增殖.
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三七三醇皂苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠细胞增殖的影响
目的:了解局灶性脑缺血再灌注后梗死区周围细胞增殖的动态变化,以及三七三醇皂苷(PTS)对其表达的影响.方法:采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞(MACO)2h、不同再灌注时间段(3d、7d、14d、28d)的大鼠短暂局灶性脑缺血(transient focal cerebral ischemia)模型.应用5-溴脱氧尿嘧啶(5-bromodeoxyuridine,Brdu)和Brdu/Nestin免疫双标记法观察再灌注损伤后3、7、14、28d时大鼠神经前体细胞的增殖情况.结果:脑缺血再灌注后14d细胞增殖水平达到峰值,至再灌注28d细胞增殖水平已明显回落,但仍较正常水平高.PTS组细胞增殖水平于再灌注后7d～28d均较相同时间段对照组增强(P＜0.05).再灌注7、14d,PTS组Brdu+/Nestin阳性细胞比例高于N.S 组(P＜0.05).结论:PTS可促进缺血再灌注后细胞的增殖水平.
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实验性哮喘气道细胞DNA合成和气道重塑研究
[目的]观察重复过敏原吸入刺激致敏的大鼠气道细胞DNA合成和气道壁结构的改变,并探讨气道重塑反应发生的机制.[方法]应用SD大鼠建立哮喘模型,采用双标免疫组化技术和计算机图像分析系统对气道细胞的DNA合成和气道重塑进行研究.[结果]①模型组气道平滑肌细胞和上皮细胞的DNA合成Brdu阳性计数明显高于正常对照组(P＜0.01,P＜0.05);②模型组气道平滑肌细胞和上皮细胞DNA合成Brdu阳性计数和气道直径呈高度正相关(P＜0.01,P＜0.05),正常对照组无明显相关性(P＞0.01,P＞0.05);③模型组上皮层厚度明显大于正常对照组(P＜0.01),平滑肌层厚度、气道直径和α-平滑肌肌动蛋白阳性区面积和正常对照组差异无显著性(P＞0.05).[结论]变态反应性炎症所致的微环境改变可以导致气道细胞DNA合成增加以及细胞增生,可能是导致气道重塑反应发生的主要机制.
