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展示技术在细胞膜穿透肽筛选、鉴定中的应用
以展示技术筛选不同功能的细胞膜穿透肽（CPP）是近年的研究热点。目前使用广泛的展示技术是噬菌体展示和mRNA展示技术。本文将对噬菌体展示和mRNA展示技术的原理、方法和应用研究作一综述，并对近年来展示技术在筛选、鉴定CPP所取得的进展进行回顾和总结。
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与Aβ42结合的噬菌体展示多肽的淘选
阿兹海默症（Alzheimer’s disease, AD），即老年痴呆，是一种十分常见的神经系统退行性疾病，β-淀粉样蛋白（Aβ）在细胞外异常聚集、沉积是其致病机制之一。目的：筛选与Aβ42集合的噬菌体多肽。方法：本实验以Aβ42寡聚体为靶蛋白，对随机环形噬菌体七肽库进行筛选，对于筛选的结果用酶联免疫吸附试验进行验证。结果：得到200株噬菌体克隆，全部为阳性并且部分与Aβ42的结合力极强。结论：通过对随机环形噬菌体七肽库筛选可得到与靶蛋白（Aβ42）结合的噬菌体阳性克隆，理论上这些阳性噬菌体所展示的多肽可以作为配体与Aβ42（受体）结合，而这种结合则有可能影响Aβ42寡聚体的聚集和沉淀，从而为阿兹海默症的治疗提供某些支持。
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十二肽库中与结缔组织生长因子特异结合噬菌体的筛选
目的:从随机十二肽库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆.方法:用基因重组方法制备硫氧化还原蛋白(TrxA)以及硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白;噬菌体肽库经TrxA预吸附后,与TrxA-CTGF结合,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取10个克隆,提取单链DNA后测序;用直接和间接ELISA方法检测噬菌体阳性克隆与CTGF结合的特异性.结果:10个克隆中8个DNA序列完全一致(810A),另有2个有不同序列(810B,810C);3个阳性克隆用直接和间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P＜0.05).结论:成功获得与CTGF特异结合的噬菌体克隆,为CTGF小分子抑制剂的研究打下基础.
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应用噬菌体随机十二肽库筛选TGF-β1相关模拟肽的实验研究
目的 应用噬菌体随机12肤库生物筛选获得转化生长因子-β1(TGF-β1)噬菌体模拟肽.方法 以人TGF-β1单克隆抗体为靶,进行4轮生物淘选,随机挑取单克隆噬菌体,ELISA法检测单克隆噬菌体的结合力.对结合力较好的单克隆噬菌体提取噬菌体DNA,进行测序,行序列分析.结果 经过4轮生物淘选,特异性噬菌体模拟肽获得了富集,ELISA检测结果 显示,获得的一些噬菌体模拟肤具有较好的结合力,测序获得10个与促进成纤维细胞增殖或抑制细胞增殖有关的碱基序列.结论 从噬菌体随机十二肽库中可淘选到与TGF-β1相关的噬菌体模拟肽.
关键词： 噬菌体随机12肽库 转化生长因子β1噬菌体模拟肤 生物淘选 测序 -
应用噬菌体随机十二肽库筛选hFGF-7相关模拟肽
目的 应用噬菌体随机十二肽库生物淘选具有刺激表皮细胞增殖作用的人成纤维细胞生长因子-7(hFGF-7)噬菌体模拟肽.方法以hFGF-7单克隆抗体为靶,进行4轮生物淘选噬菌体随机十二肽库;随机挑取单克隆噬菌体,应用ELISA方法检测单克隆噬菌体的结合力,对结合力较好的单克隆噬菌体提取噬菌体DNA,进行测序,并行序列分析.结杲经过4轮生物淘选,特异性噬菌体模拟肽荻得了富集,ELISA检测结果显示获得的一些噬菌体模拟肽具有较好的结合力,测序获得11个与促进细胞分裂、增殖或抑制细胞增殖有关的碱基序列.结论从噬菌体随机十二肽库中可淘选到与hFGF-7相关的噬菌体模拟肽,其中部分噬菌体模拟肽可能会促进表皮细胞增殖,期望将来可应用于促进创面愈合.
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应用噬菌体随机七肽库筛选人角质细胞生长因子模拟肽
目的 应用噬菌体随机七肽库生物淘选人角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)噬菌体模拟肽. 方法 以人KGF单克隆抗体为靶,对噬菌体随机七肽库进行4轮生物淘选,测定噬菌体滴度.随机挑取单克隆噬菌体行ELISA检测其结合力,对结合活性较好的单克隆噬菌体提取噬菌体DNA,测序,并应用Basic BLAST系统行序列相似性和同源性分析. 结果 经过4轮生物淘选获得的噬菌体滴度逐渐升高,特异性噬菌体模拟肽获得了富集,行ELISA检测的单克隆噬菌体滴度均可达到2.0×1014 pfu/mL.取吸光度值显示与特异性抗体具有较好结合性的单克隆噬菌体进行测序,共获得26个与促进分裂、生长有关的碱基序列,其中有2个序列与人KGF相似;同源序列分析显示26个碱基序列的共同序列与人KGF的部分序列相似. 结论 从噬菌体随机七肽库中可淘选到与人KGF DNA序列相似或相关的噬菌体模拟肽,有望改善人KGF性能,促进创面愈合和改善组织工程皮肤替代物的性能.
关键词： 噬菌体随机七肽库 人角质细胞生长因子模拟肽 生物淘选 测序
