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乳腺癌干细胞富集及其特异性多肽的筛选
目的:无血清培养法富集乳腺癌干细胞(breast cancer stem cell,BCSC)并采用噬菌体展示技术,筛选能特异性结合乳腺癌干细胞的噬菌体多肽.方法:无血清培养法富集乳腺癌MDA-MB-231细胞株中干细胞并以此为靶标,以hs578bst人正常乳腺细胞及普通培养的MDA MB-231细胞为减性筛选细胞,对噬菌体随机肽库进行双重减性筛选,选取富集后的阳性噬菌体单克隆,ELISA及DAB染色鉴定阳性噬菌体特异性并测序.结果:经过3轮筛选,噬菌体得到约500倍的富集,随机挑选10株单克隆噬菌体.ELISA显示,6号噬菌体单克隆对乳腺癌干细胞的亲和力是对照的6.14倍;DAB鉴定亦显示,其对乳腺癌干细胞的特异性及亲和力高,对阳性噬菌体DNA测序翻译得到十二肽氨基酸为GYSASRSTIPGK.结论:通过干细胞富集及噬菌体展示技术,成功筛选出能够特异性结合乳腺癌干细胞的特异性噬菌体多肽,为乳腺癌的干细胞靶向治疗和深入研究奠定基础.
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噬菌体随机十二肽库淘选三水白虎汤作用于类风湿关节炎滑膜细胞的靶点研究
目的:利用噬菌体随机十二肽库淘选出与三水白虎汤(SSBH)作用的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)特异性结合的多肽,寻找SSBH治疗类风湿关节炎的蛋白靶点.方法:以SSBH处理过的RASFs为靶细胞,生理盐水(NS)处理的RASFs为吸附细胞,全细胞差减筛选法对噬菌体十二肽库进行3轮淘选,挑取单克隆、扩增纯化噬菌体,并初步鉴定噬菌体克隆的亲和力,阳性克隆测序后进行生物学分析.结果:3轮淘选后,随机挑选32个噬菌体克隆进行DNA序列分析,展示SGVYKVAYDWQH十二肽的噬菌体被富集约为56％ (18/32).结论:从噬菌体肽库筛选到SSBH作用RASFs的特异性结合短肽,并分析出相关作用蛋白.
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噬菌体肽库筛选转化生长因子βⅡ型受体亲和肽
目的:从噬菌体随机肽库中筛选转化生长因子β(TGF-β)Ⅱ型受体的亲和短肽. 方法:以重组可溶性人TGF-βⅡ型受体作为靶标, 应用噬菌体随机十二肽库进行筛选, 经过3轮淘选, 提取阳性噬菌体克隆ssDNA,测序并进行序列分析. 结果:通过筛选噬菌体获得富集,挑选10个能与人TGF-βⅡ型受体特异性结合的噬菌体克隆,测序得到4个核酸序列,未发现共有保守序列. 结论:通过噬菌体肽库技术能筛选出与TGF-βⅡ型受体结合的噬菌体展示肽,为进一步研究TGF-βⅡ型受体亲和短肽及在抗肝纤维化中的作用提供依据.
关键词： 转化生长因子βⅡ型受体 亲和短肽 噬菌体随机十二肽库 肝纤维化 -
应用噬菌体随机十二肽库筛选hFGF-7相关模拟肽
目的 应用噬菌体随机十二肽库生物淘选具有刺激表皮细胞增殖作用的人成纤维细胞生长因子-7(hFGF-7)噬菌体模拟肽.方法以hFGF-7单克隆抗体为靶,进行4轮生物淘选噬菌体随机十二肽库;随机挑取单克隆噬菌体,应用ELISA方法检测单克隆噬菌体的结合力,对结合力较好的单克隆噬菌体提取噬菌体DNA,进行测序,并行序列分析.结杲经过4轮生物淘选,特异性噬菌体模拟肽荻得了富集,ELISA检测结果显示获得的一些噬菌体模拟肽具有较好的结合力,测序获得11个与促进细胞分裂、增殖或抑制细胞增殖有关的碱基序列.结论从噬菌体随机十二肽库中可淘选到与hFGF-7相关的噬菌体模拟肽,其中部分噬菌体模拟肽可能会促进表皮细胞增殖,期望将来可应用于促进创面愈合.
