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水芹总酚酸抗四氯化碳所致肝纤维化作用的实验研究
目的 探讨水芹总酚酸对四氯化碳所致大鼠慢性肝纤维化模型的保肝和抗肝纤维化作用及其可能机制.方法 采用四氯化碳复制慢性肝损伤动物模型(40%四氯化碳橄榄油溶液,皮下注射,首次剂量按0.5ml/100g,以后按0.3ml/100g体质量,3天1次,共42d).自造模之日开始,灌胃给药,1次/d,连续42d.末次给药后禁食24h,取大鼠血和肝脏,检测血清肝功能(ALT、AST、ALB、ALP、TP、ChE、LDH)指标、肝纤维化指标(HA、LN、Ⅲ-C、Ⅳ-C)和肝组织中SOD活力与MDA含量及免疫组化法测α-SMA、TGF-β1、TIMP-1的表达量和光镜下观察肝脏组织学变化.结果 模型组大鼠有明显肝损伤和慢性纤维化表现;各给药组肝功能和肝纤维化均有不同程度的改善,病理组织学检查结果表明其肝脏病变程度均较模型组明显减轻.结论 水芹总酚酸对慢性肝纤维化大鼠具有明显的保肝和抗纤维化作用,其机制可能与清除自由基和抗氧化作用以及抑制肝星状细胞的活化有关.
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水芹总酚酸对人肝癌2.2.15细胞周期的影响
目的 研究水芹总酚酸对人肝癌2.2.15细胞增殖抑制及细胞周期的影响.方法 用不同浓度的水芹总酚酸作用于体外培养的2.2.15细胞,采用MTT法检测水芹总酚酸对2.2.15细胞增殖抑制能力；倒置显微镜观察2.2.15细胞的形态学变化；流式细胞术检测水芹总酚酸对2.2.15细胞周期的影响.结果 水芹总酚酸对2.2.15细胞增殖具有明显的抑制作用,且具有剂量依赖性；流式细胞术检测表明水芹总酚酸作用于2.2.15细胞后,可将细胞阻滞在S期.结论 水芹总酚酸对人肝癌2.2.15细胞具有明显的抑制增殖作用,可能与阻滞细胞周期有关.
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水芹总酚酸对正常小鼠免疫功能的影响
目的 探讨水芹总酚酸对正常小鼠免疫功能的影响.方法 用分光光度法测定血清溶血素含量,MTT法检测T淋巴细胞增殖能力及ELISA法测定脾细胞培养上清中IL-2的含量,碳粒廓清法测定小鼠外周血碳粒廓清指数.结果 水芹总酚酸能够显著提高血清溶血素水平及脾细胞培养上清中IL-2水平,促进ConA诱导的T淋巴细胞增殖,提高正常小鼠外周血碳粒廓清指数.结论水芹总酚酸对正常小鼠的免疫功能具有增强作用.
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水芹总酚酸治疗大鼠非酒精性脂肪肝的实验研究
目的 观察水芹总酚酸[total phenolic acid extracted from Oenanthe javanica(BI)DC(OJTPA)],OJTPA对高糖高脂肪饲料诱导的大鼠非酒精性脂肪肝的治疗作用.方法 用高糖高脂肪饲料喂养大鼠30d建立非酒精性脂肪肝模型,停止造模,分组并给药,连续给药4周,检测血清和肝脏中生化指标,做肝脏组织病理学检查.结果 非酒精性脂肪肝大鼠经OJTPA治疗后,血清中TG含量和ALT活性显著降低(P<0.05);肝组织中TG、TC、MDA、FFA含量减少,SOD活力增加(P<0.05);肝细胞脂肪肝程度明显减轻,肝细胞坏死程度减轻.结论 水芹总酚酸能降低高糖高脂肪饮食诱导的非酒精性脂肪肝大鼠血液和肝脏中TG含量,对非酒精性脂肪肝有治疗作用,其作用机制可能与水芹总酚酸的抗氧化作用,减轻脂质过氧化引起的肝脏损伤,降低肝脏脂肪沉积有关.
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水芹总酚酸对鸭乙肝病毒DNA的抑制作用
目的 观察水芹总酚酸对鸭乙肝病毒(DHBV)DNA的抑制作用,验证其体内抗乙肝病毒作用.方法 取造模成功雏鸭随机分成模型组、拉米夫定(50mg·kg-1·d-1)阳性药对照组、水芹总酚酸(125、250、500mg·kg-1·d-1)3个剂量组.自感染第7天灌胃给药,2次/d,共10d.分别留取感染第7天(0d)、给药5d、给药10d及停药3d的血清,斑点杂交、放射自显影测定血清中DHBV-DNA的OD值进行自身和组间比较;另取肝组织适量,10%甲醛固定,常规石蜡切片、HE染色,镜下观察肝组织病理变化.结果 水芹总酚酸用药组在5d、10d和停药3d均对DHBV-DNA具有明显的抑制作用.病理学观察用药组鸭肝小叶结构基本完整,肝细胞变性改变明显较轻,点、灶状坏死散在分布;而模型组鸭肝实质细胞明显嗜酸性变、水肿、脂肪变等改变和弥漫分布的点、灶性坏死,表现为小叶周边肝细胞坏死广泛,界板参差不齐,浸润的炎细胞向小叶内延伸,两组肝组织比较差异显著.结论 水芹总酚酸对乙肝病毒DNA具有显著的抑制作用,且具有较强的肝细胞保护作用.
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水芹总酚酸对2.2.15细胞分泌HBsAg与HBeAg的抑制作用
目的 观察水芹总酚酸对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用.方法 以2.2.15细胞为研究对象,通过细胞毒性实验确定水芹总酚酸对细胞的大无毒浓度(TC0),在大无毒浓度以下将药物用培养液对倍稀释成500、250、125μg·mL-1加入2.2.15细胞进行培养,每4d换同浓度药物培养液;分别收集第4、8天以及停药后4d的培养液,酶联免疫法(EHSA)测定HBsAg、HBeAg含量.结果 水芹总酚酸大无毒浓度为500μg·mL-1,在大无毒浓度时对HBsAg、HBeAg具有明显的抑制作用,第8天时的抑制率分别为59.33%和90%,半数抑制浓度(IC50)分别为484.17、379.89μg·mL-1,治疗指数(TI)分别为3.158、4.025,其中对HBeAg的抑制作用优于HBsAg.结论 水芹总酚酸对2.2.15细胞分泌的HBsAg、HBeAg有显著的抑制作用.
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水芹总酚酸对D-半乳糖胺盐酸盐诱导肝损伤的保护作用
目的 观察水芹总酚酸(OJTPA)对D-半乳糖胺盐酸盐(D-Galn)致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 将小鼠随机分为生理氯化钠溶液(NS)组、D-Galn模型组、OJTPA低、中、高(125、250、500mg·kg-1)剂量组和阳性药联苯双酯(LB,150mg·ks-1)组,除NS组、D-Galn模型组给予与OJTPA高剂量同等剂量的NS外,给药各组均分别给药7d后,以D-Galn(800mg·kg-1)给各组小鼠(NS组除外)腹腔注射,使之中毒,造成急性肝损伤,24h后杀鼠取材,分别检测各组动物肝功能等指标并取肝脏作病理组织学检查.结果 D-Galn模型组小鼠肝功能明显异常,ALT、AST显著升高,肝组织变性、坏死严重.OJTPA中、高剂量组小鼠血清中ALT、AST的水平均非常显著低于模型组(P＜0.001),并呈良好的剂量依赖性;此外,还可显著降低肝损伤小鼠血清丙二醛的含量,显著升高其超氧化物歧化酶活力;肝组织镜检证实,OJTPA中、高剂量均能减轻中毒小鼠肝细胞损伤程度.结论 OJTPA对D-Galn致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用.
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水芹总酚酸退黄作用的实验研究
目的 观察水芹总酚酸(OJTPA)对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致大鼠黄疸模型的退黄作用.方法 将Wistar大鼠随机分为6组:正常组、ANIT模型对照组、茵栀黄颗粒阳性药物组、OJTPA高、中、低(300、150、75 mg·kg-1)3个剂量组.各给药组连续给药7d,后一次给药1h后,ANIT按75mg·kg-1体质量灌服大鼠诱发黄疽模型,正常组给等量的花生油.72h后取血取肝,检测血清总胆红素(T-Bil)含量以及肝组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,同时观察肝脏组织病理学的改变.结果 模型组大鼠血清T-Bil含量及肝脏MDA含量明显升高(P<0.01),肝脏SOD活性明显降低(P<0.01);OJTPA能明显对抗这种改变,其退黄率分别为58.12%、43.12%、22.19%.肝脏组织病理学检查证实,OJTPA能减轻中毒大鼠肝细胞损伤程度.结论 OJTPA退黄效果肯定,其机制可能与抗脂质过氧化有关.
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水芹总酚酸对小鼠CCl4肝损伤的保护作用
目的 观察水芹总酚酸(OJTPA)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 将180只小鼠随机分为正常组,联苯双酯阳性药物组,CCl4模型对照组和OJTPA高、中、低(500、250、125mg-kg-1)3个剂量组.应用0.1%CCl4腹腔注射致小鼠急性肝损伤模型,通过测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性以及小鼠肝组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,并观察肝脏组织病理学变化,对OJTPA的保肝作用进行研究.结果 模型组小鼠肝功能明显异常,肝组织变性、坏死严重;OJTPA组能明显改善CCl4中毒小鼠肝功能,其降酶率(ALT)以高、中、低剂量分别为74.74%、55.87%、7.25%;肝组织切片镜检证实,OJTPA能减轻中毒小鼠肝细胞损伤程度.结论 OJTPA对急性肝损伤小鼠有较好的保肝作用.
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水芹总酚酸对人类免疫缺陷病毒逆转录酶的抑制作用
目的 探讨水芹总酚酸对人类免疫缺陷病毒(HIV)逆转录酶的影响作用.方法 将水芹总酚酸和阳性对照药奈韦拉平用磷酸盐缓冲液(PBS)和二甲基亚砜(DMSO)分别配制成10、1、0.1 mg/L和50(13.32 mg/L)、10(2.66 mg/L)、1 μmol/L(0.27 mg/L)的药液,加入Oligo(dT)15包被板中,终用酶标仪测定405 nm波长处OD值,计算各加药组OD值/空白对照组OD值,判断药物对HIV逆转录酶的影响.结果 与空白对照组相比,水芹总酚酸对HIV逆转录酶活性有较强的抑制作用,高、中、低剂量组的OD值分别为(0.316±0.033)、(0.442±0.044)、(0.627±0.009)；平均抑制率分别为85.20％、73.67％和55.83％,具有良好的量效关系(P＜ 0.01).阳性药奈韦拉平50μ mol/L OD值为(0.245±0.017),平均抑制率为94.36％(P＜ 0.01).结论 水芹总酚酸对HIV逆转录酶有比较显著的抑制作用.
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水芹总酚酸对2.2.15细胞HBV DNA、cccDNA的抑制作用
目的 观察水芹总酚酸对2.2.15细胞HBV-DNA、cccDNA的抑制作用.方法 药物稀释成500、250、125 mg·L-1加入2.2.15细胞进行培养,每4 d换含同浓度药物培养液;分别收集d 4、8以及停药后4 d的细胞,试剂盒提取HBV-DNA、cccDNA,荧光定量PCR(FQ-PCR)测定其含量,观察水芹总酚酸对其抑制作用.结果 水芹总酚酸对HBV-DNA和cccDNA都具有很好的抑制作用,在细胞培养的d 8其高、中剂量(500、250 mg·L-1)的抑制作用达到大: HBV-DNA为62.3%和47.7%,cccDNA为62.7%和61.3%,且在停药后3 d仍保持较高的抑制率(P<0.05).结论 水芹总酚酸可以有效的抑制2.2.15细胞HBV-DNA、cccDNA的表达,抗病毒作用明显,且无明显的停药反跳现象.
