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醛-酮还原酶文献资料
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重组人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶的克隆表达及应用
克隆、表达人和人鼠醇脱氢酶(ADH)、醛一酮还原酶(AKR)基因全长cDNA,研究扁桃酸(MA)代谢机制.设计引物,利用RT-PCR克隆人和大鼠醇脱氧酶、醛-酮还原酶基因全长cDNA.测序正确的cDNA被克隆到表达载体pET-28a(+)上并在大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达.利用亲和色谱纯化相应的酶,通过检测其在340 nm吸收度值的变化进行酶活性测定.获得的醇脱氢酶与扁桃酸,醛-酮还原酶与苯乙酮酸(PGA)共孵育,采用HPLC分析其代谢和转化情况.通过测序,目的蛋白的cDNA序列完全正确,在宿主菌中获得良好的可溶性表达,经Ni2+亲和柱纯化后目的蛋白达到了电泳纯,具有较好的催化活性.人ADH2对扁桃酸的代谢具有立体选择性,优先代谢S-MA,对S-MA的代谢能力较强.大鼠ADH1对扁桃酸无代谢活性,人和大鼠AKR对苯乙酮酸均无代谢.成功构建人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶的表达质粒,获得高活性的蛋白.这些重组酶模型可以用于由醇脱氢酶和醛-酮还原酶介导的药物代谢研究.
