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NPS-2390对肾小管上皮细胞钙超载及黏附晶体能力的影响
目的 研究钙敏感受体(CasR)抑制药NPS-2390对肾小管上皮细胞钙超载及黏附晶体能力的影响.方法 在对数生长期的NRK-52E细胞中转染过表达CasR载体及空白载体,分别作为模型组及对照组.实验组在模型组的基础上加入5 μg·mL-NPS-2390.蛋白免疫印迹(Western blot)及荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)技术检测各组细胞CasR的表达情况.激光共聚焦技术检测各组细胞中钙离子浓度的变化,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,用红色荧光标记的一水草酸钙晶体(AlexaFluor350COM)刺激细胞,荧光显微镜观察细胞荧光强度.结果 模型组、对照组及实验组CasR的蛋白表达量分别为0.73±0.06,0.33±0.04,0.29±0.03,模型组CasR的蛋白表达量显著高于对照组及实验组,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).模型组、对照组及实验组CasR的mRNA表达量分别为0.58±0.05,0.15±0.01及0.10±0.01,模型组CasR的mRNA表达量显著高于对照组及实验组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).模型组、对照组及实验组钙离子荧光强度增加率分别为-34.8％,9.0％,4.3％,模型组荧光强度增加率显著低于对照组及实验组,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).模型组、对照组及实验组细胞内晶体荧光强度分别为(166±22),(241±29),(255±32) cd,模型组晶体荧光强度显著低于对照组及实验组,差异有统计学意义(P＜0.05).模型组、对照组及实验组细胞活力在48h时分别为3.42±0.35,2.74±0.32,2.55±0.28,模型组细胞活力显著高于对照组及实验组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).模型组、对照组及实验组细胞活力在72 h时分别为7.16±0.63,5.64±0.51,5.24±0.58,模型组细胞活力显著高于对照组及实验组,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).结论 NPS-2390可抑制CasR的表达,进而加重肾小管上皮细胞钙超载并引起细胞活性减弱,促进细胞黏附晶体.
