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稳定同位素稀释超高效液相-串联质谱联用法同时测定人血清中13种氨基酸的含量
目的 建立同时测定人血清中13种氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法.方法 以稳定同位素标记的氨基酸作为内标,血清样本经沉淀蛋白后,取上清液进行UPLC-MS/MS分析,色谱柱为Acquity BEH amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),流动相为乙腈-水-20mmol· L-1甲酸铵-0.15％甲酸溶液,用甲酸调pH至3.0,梯度洗脱.结果 基质效应不影响测定结果,保留时间(tR)均在11 min内,精氨酸、谷氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和苏氨酸的线性范围为1.0～ 200.0 μmol·L-,酪氨酸、丝氨酸的线性范围为5.0 ～ 200.0 μmol · L-,丙氨酸、甘氨酸的线性范围为10.0～200.0 μmol·L-1,各氨基酸在标准曲线范围内线性关系良好(r＞0.9971),加标回收率均≥89.6％,批内精密度(RSD)均≤3.2％,批间精密度(RSD)均≤4.1％,在测定过程中稳定性符合要求.结论 该方法操作简便、专属性强,可同时测定人血清中13种内源性氨基酸的含量.
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以稳定同位素为内标的HILIC-MS/MS法同时测定人血清中5种氨基酸的含量
目的：建立同时测定人血清中缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的分析方法。方法：以稳定同位素标记的氨基酸作为内标，血清样本经乙腈沉淀蛋白后，取上清液进行HILIC-MS/MS分析，色谱柱为Syncronis HILIC （150 mm×2.1 mm，5μm），流动相为乙腈-80 mmol·L-1醋酸铵，梯度洗脱。结果：基质效应不影响测定结果，各氨基酸在标准曲线范围内线性关系良好，准确度、批内和批间精密度均小于15%，在测定过程中稳定性符合要求。结论：该方法可同时测定人血清中5种内源性氨基酸的含量。
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氘代沃拉帕沙的设计与合成
沃拉帕沙(vorapaxar)是一种新型蛋白酶激活受体1 (PAR-1 )拮抗剂,可抑制凝血过程.氘代沃拉帕沙作为内标可满足临床样品分析检测的需要.本文以未标记的沃拉帕沙为起始原料,经过水解、缩合、酯交换和氢氘交换4步反应首次高效地合成以D8为主的氘代沃拉帕沙.所有中间体和终产物均经过核磁和高分辨质谱确证,所制备氘代化合物[D8]沃拉帕沙满足内标化合物的使用要求.
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基于SISCAPA技术的疾病标志物的转化医学研究
基于蛋白质组学技术的基础生物研究筛选出了大量蛋白候选标志物,由于缺乏有效的验证手段,阻碍了其在疾病诊断、临床处理和疾病预后中的应用.目前,验证疾病候选标志蛋白主要依赖于免疫学分析方法,如ELISA.但对所有候选标志物都开发ELISA法,是不切合实际的,因为抗体开发费用高昂,耗时长,成功率低[1-3].
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稳定同位素iTRAQ标记联合液相色谱-串联质谱法定量分析药物性肝损伤患者血清氨基酸的变化
目的：探索药物性肝损伤（DILI）患者治疗的不同阶段血清氨基酸水平的变化差异，探讨其临床意义及可用于DILI早期诊断及疗效评价的氨基酸类生物标志物。方法收集21例健康志愿者（健康组）及24例DILI患者不同阶段（初诊、治疗、转归）的血清标本，采用稳定同位素iTRAQ标记方法联合液相色谱串联质谱技术检测血清氨基酸进行定量并分析其差异。结果在血清中共定量氨基酸28种，与健康组比较，DILI患者共有14种氨基酸浓度在诊疗不同阶段发生显著性改变；其中异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及丝氨酸的浓度在初诊时显著升高，随治疗进程降低，逐渐接近于正常水平。结论4种氨基酸中，苯丙氨酸与DILI的相关性更高，可能为DILI早期诊断及治疗效果评价的潜在生物标志物。
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稳定同位素标记结合离子阱质谱鉴别大鼠尿中胍丁胺及其乙酰化代谢产物
目的:识别大鼠给予胍丁胺后尿中药物原形及其代谢产物,推测其可能的代谢途径.方法:采用同位素2H标记药物,尿样经固相提取后利用液相色谱-电喷雾离子阱质谱进行分离检测,利用离子簇技术和离子阱MSn技术对药物原形及其代谢产物进行识别.结果:在大鼠尿中检测到胍丁胺原形,并发现其乙酰化代谢产物,作者未见文献报道.结论:胍丁胺在大鼠尿中主要以原形和乙酰化产物2种途径排泄.
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稳定同位素标记多肽的合成及应用
同位素稀释质谱法避免了基质效应和分析条件的影响,在定量分析和准确度方面具有特殊优势,在生物分子定量分析领域得到了普遍应用.稳定同位素标记肽段作为重要内标试剂广泛应用于蛋白质组学定量及食品过敏原检测.同位素稀释质谱技术的发展将会进一步推动稳定同位素标签技术在新药研发、临床病理、蛋白质组学、食品安全等领域的研究应用.本文从生物合成法和化学合成法方面综述了稳定同位素标记多肽的合成,并分别对细胞代谢标记法、高等真核生物标记法、酶催化标记法、乙酰化标记、标记氨基酸缩合法等合成方法进行了评述;同时介绍了稳定同位素标记多肽在乳制品检测、生物蛋白定量、蛋白测序及药物代谢、食品过敏原检测中的应用.
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邻苯二甲酸二甲酯-D6的合成
以甲醇-D4和苯酐为原料,在缩合剂的催化下合成邻苯二甲酸二甲酯-D6,以消耗的甲醇-D4计算,邻苯二甲酸二甲酯-D6收率为88.0％.产品结构经质谱和核磁共振波谱等表征确定为目标化合物,氘原子同位素丰度为99.1％,纯度为99.0％,结果表明,合成方法操作简便,不会造成丰度稀释.合成的邻苯二甲酸二甲酯-D6可作为食品安全领域检测用同位素内标试剂.
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稳定同位素标记方法在蛋白质组学定量分析中的应用
蛋白质表达水平定量分析是蛋白质组学研究的一项关键内容,它依赖于精确的、高通量的、具重复性的技术.目前,应用稳定同位素标记技术定量蛋白质表达水平是准确的方法之一,且联合色谱质谱技术更具优势.本文论述了这一技术的广泛应用和新的研究进展.
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稳定同位素13 C或D标记对甲氧基苯甲酸的合成
稳定同位素标记对甲氧基苯甲酸是防腐剂、香料及药物等稳定同位素标记内标试剂合成中的重要中间体.本文以尼泊金乙酯(对羟基苯甲酸乙酯)和碘甲烷-13 C或碘甲烷-D3为原料,碱性条件下经2步反应合成对甲氧基苯甲酸-甲氧基-13 C和对甲氧基苯甲酸-甲氧基-D3.通过单因素实验确定适合的反应温度、物料摩尔比、反应时间,优化工艺参数为:反应温度为80℃,物料摩尔比n(碘甲烷-13 C/D3):n(尼泊金乙酯)=1.15:1,反应时间为6 h.产品经液质联用仪(LC-M S)测试化学纯度和同位素丰度、经核磁共振(1 H NMR)进行结构确认,对甲氧基苯甲酸-甲氧基-13C的收率为91.12％,碘甲烷-13C利用率为79.32％,产品熔点为186.5～187.8℃,化学纯度为99.1％,13 C同位素丰度为99.0％;标记对甲氧基苯甲酸-甲氧基-D3的收率为90.49％,碘甲烷-D3利用率为78.70％,产品熔点为186.3～188.1℃,化学纯度为99.0％,D同位素丰度为98.1％.
