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一步等位基因特异扩增法检测中国人N-乙酰化酶基因型
目的建立简化的一步等位基因特异扩增法(ASA),研究中国人N-乙酰化酶(NAT2)多态性等位基因的分布.方法用一步法直接检测21 5名中国健康人NAT2*5,*6,*7等位基因.结果一步法测定结果与两步法一致.21 5名健康中国人NAT2*5,*6,*7 3种突变型等位基因的基因频率分别为3.3%,24.6%和10.0%.基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05).野生型纯合子、杂合子和突变型纯合子分别为85,96和34人,分别占39.5%,44.7%和15.8%.结论一步法测定NAT2基因准确、方便,为临床个体化合理用药提供理论基础.
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突变阻断扩增法检测中国人CYP2D6*10、*14等位基因
目的 根据突变阻断扩增原理,建立用于检测中国人CYP2D6*10及*14等位基因的方法.方法 采用单管四引物法检测CYP2D6*10等位基因,建立等位基因特异扩增法检测CYP2D6*14等位基因,检测295名健康中国汉族人CYP2D6*10等位基因.结果 CYP2D6*10及*14等位基因基因频率分别为55.8%和1.8%,295位受试者中包括1位*14/*14、6位*1/*14、3位*10/*14,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(x2=2.15,df=5,P＞0.82).结论 本室建立的CYP2D6*10、*14等位基因分析法具有方便快捷、结果准确可靠的特点.
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ASA法测定细胞色素P450 2D6酶缺陷等位基因CYP2D6E
目的:建立细胞色素P450 2D6(CYP2D6)第3023位A→C突变造成CYP2D6酶活性缺陷的等位基因CYP2D6E的测定方法.方法:利用等位基因特异扩增法(ASA)为基本原理,设计两对引物分别扩增野生型等位基因和突变型等位基因.结果:经396例测定,发现2例CYP2D6E与CYP2D6B的异突变型纯合子,其表现型均为慢代谢者.阳性对照说明本法重复性好,阴性对照显示本法无污染问题.结论:本法比PCR-RFLP法更为快捷、更少污染.对CYP2D6E的测定有助于准确预测CYP2D6表现型.
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等位基因特异扩增法检测移植患者多药耐药基因多态性
目的:建立等位基因特异扩增法(Allele-Specific Amplifcation,ASA-PCR)研究移植患者多药耐药基因(multi-drug re-sistance gene,MDR1)多态性.方法:用ASA-PCR对177位肝、肾移植患者的MDR1第26外显子C3435T、第21外显子G2677T/A位点和第12外显子C1236T位点进行基因分型.结果:ASA.PCR测定结果与聚合酶链式反应.限制性片断长度多态性方法(Polymerase chain reaction-Restriction Fragment Analysis,PCR-RFLP)的测定结果一致.177例移植患者DNA标本中,C3435T:CC型69例(39.0%),CT型92例(52.0%),TT型16例(9.0%);G2677T/A:GG型39例(22.0%),GT型48例(27.1%),TT型32例(18.1%),GA型30例(16.9%),AT型24例(13.6%),AA型4例(2.3%);C1236T:CC型23例(13.0%),CT型88例(49.7%),TT型66例(37.3%).结论:采用ASA-PCR检测移植患者MDRl多态性准确、方便,可为临床个体化用药提供理论依据.
