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含P6A寡肽血液的HPLC分离分析
目的:建立可用于寡肽血液浓度测定并可与ESI-MS对接的HPLC方法.方法:以ARPAK溶栓寡肽为模型化合物,考察其对色谱系统的稳定性,选择适宜的洗脱系统,消除寡肽与血浆蛋白的相互作用,确定柱温与寡肽峰面积及保留时间的关系,寻找血液中寡肽降解酶抑制剂,比较不同的填料对从血液中提取寡肽的影响,优化寡肽柱前衍生化的温度、时间、pH环境和试剂.结果:含ARPAK的小鼠血浆在50℃、pH 8.5的条件下与丹酰氯反应70min,衍生化程度可达峰值.含ARPAK的血浆溶液丹酰氯衍生化后用HClO4处理,可以有效地使被测的丹酰氯衍生化的ARPAK从蛋白中游离.pH 9.4的磷酸盐缓冲溶液可以有效地阻滞ARPAK在任意时刻的降解.采用自装的XAD-2柱,可以定量从鼠血浆中回收ARPAK.ARPAK在A相为pH 2.1磷酸盐缓冲液,B相为乙腈的流动相中显示佳的分离度.室温进样,20%A:80%B至45%A:55%B,10min;45%A:55%B至70%A:30%B,1min,丹酰氯衍生化ARPAK的保留时间为11.77min,检测限为10ng.结论:上述HPLC条件以及样品前处理方法可用于寡肽血样HPLC/ESI-MS研究.
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中国药典2000年版一部环维黄杨星D质量标准质疑
本文通过薄层色谱法及荧光衍生化高效液相色谱法测定环维黄杨星D含量,表明中国药典2000年版一部收载的环维黄杨星D质量标准存在以下不足:①其他生物碱检查薄层色谱系统适用性差,无法分出环维黄杨星D中杂质;②由于点样量低,无法控制环维黄杨星D中杂质;③含量测定方法由于专属性差,难于控制样品中环维黄杨星D的实际含量.
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RP-HPLC荧光衍生化法测定人血清中胆固醇和胆甾烷醇含量
应用荧光试剂2-(4-羧基苯基)-4,5-萘骈咪唑(CNI)为衍生化试剂,用RP-HPLC法测定人血清中胆固醇和胆甾烷醇含量.色谱条件:zorbax Bp C8柱(250 mm×4.6 mm,ID)作色谱柱;乙腈-甲醇(90∶10)为流动相;二十二烷醇作内标.平均回收率分别是96.19%和94.81%,进样量20 μL时低检出质量浓度分别为1.0 μg/L和1.5 μg/L.
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丹磺酰氯对异丙酚荧光衍生化的工艺研究
目的：以丹磺酰氯（DNS-Cl）作为荧光衍生化试剂对异丙酚进行荧光衍生化方法的研究与探讨。方法 DNS-Cl 对异丙酚荧光衍生化后，衍生产物用荧光分光光度法检测，通过单因素变量法考察衍生化条件。结果当 DNS-Cl 与异丙酚的摩尔比为8∶1，在浓度为0．1 mol／L 氢氧化钠碱性条件下60℃水浴避光反应5 min后，衍生产物用环己烷萃取1 min 效果佳。结论该荧光衍生化条件温和、反应速度快，DNS-Cl 可以应用于异丙酚的衍生化。
