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小鼠短指/缺指畸形肢体cDNA消减文库的构建
目的为筛选、克隆小鼠短指/缺指畸形肢体的特异表达基因,构建了GD18小鼠畸形肢体(短指/缺指)与正常肢体的差异表达的cDNA消减文库.方法应用抑制消减杂交技术(SSH),结合PCR cDNA合成法,将从总RNA中合成的双链cDNA,酶切成平均大小为400～600 bp的片段,经接头连接,两次消减杂交和两次抑制性PCR后,将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,菌液PCR筛选有插入片段的SSH克隆.结果成功地构建了GD18小鼠畸形肢体(短指/缺指)差异表达的cDNA消减文库,从中挑取275个克隆进行菌液PCR分析,结果显示其中255均得到200～600 bp插入片段.结论 SSH与PCR合成双链cDNA,是一种自微量总RNA中构建高特异性的差异表达cDNA消减文库的有效方法.消减文库的构建,有助于筛选、克隆小鼠短指/缺指畸形肢体的特异表达基因.
