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兰尼碱受体mRNA在哮喘豚鼠气道平滑肌细胞中表达的改变
目的 明确兰尼碱受体(RyR)与哮喘发病的关系,为哮喘的防治提供一条新的途径.方法 以酶消化法分离培养正常与哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),应用RT-PCR方法测定每组细胞RyR 各亚型RyR1,RyR2和RyR3的mRNA表达.结果 正常与哮喘豚鼠ASMCs中,RyR1和RyR2的mRNA均见表达,未见RyR3 mRNA的表达,并以表达RyR2 mRNA为主.哮喘时,RyR1和RyR2的mRNA相对吸光度值分别为0.43±0.05和1.5±0.6,明显高于正常组RyR1 mRNA的吸光度值0.34±0.03(n=6,P＜0.01).结论 RyR1 mRNA表达上调可能与哮喘发病相关.
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骨骼肌型ryanodine受体放射配基分析法的建立
目的探讨骨骼肌型ryanodine受体(RyR1)放射配基分析法的建立及适宜条件.方法蔗糖梯度离心提取骨骼肌肌浆网膜蛋白质组分,用3H-ryanodine进行放射配基结合实验,观察RyR1与3H-ryanodine结合的适宜条件.结果①37 ℃恒温水浴下,0～60 min内,3H-ryanodine与骨骼肌肌浆网膜蛋白质的结合量迅速增加,90 min时基本达平衡,90～120 min内无明显变化;②3H-ryanodine在1～30 nmol*L-1,匀浆蛋白质质量浓度为0.4～1.0 g*L-1范围内,3H-ryanodine与RyR1结合的效果佳.结论用3H-ryanodine在适宜的条件下可建立RyR1放射配基分析法.
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尿皮质素诱导心肌细胞内钙离子升高与兰尼碱受体活化的关系研究
目的 探讨尿皮质素(urocortin)诱导乳大鼠心肌细胞内钙离子浓度[Ca2+]i升高与兰尼碱受体(RyR)之间的关系.方法 采用体外培养的乳大鼠心肌细胞进行指标测定.采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化.结果 urocortin使心肌细胞内钙离子浓度升高;兰尼碱受体抑制剂Ryanodine和IP3受体抑制剂Xestospongin C能够部分抑制urocortin诱导的心肌细胞内钙离子浓度升高,差别有统计学意义(P<0.01).结论 urocortin能够诱导心肌细胞内钙离子浓度[Ca2+]i升高,其作用可能与活化RyR和IP3受体使心肌细胞肌质网内钙离子释放有关.
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胞内钙动员在硝普钠增加豚鼠胃窦环行肌细胞钙激活钾电流中的作用
目的:研究胞内钙动员在硝普钠(SNP)增加豚鼠胃窦环行平滑肌细胞钙敏感性钾电流[IK(Ca)]中的作用.方法:采用传统全细胞膜片箝技术,并用胶原酶急性分离单细胞.用硝普钠作为一氧化氮供体.结果:SNP100 μmol/L明显增加钙敏感性钾电流,同时也可以显著地增加瞬间外向性钾电流(STOC).SNP引发Ik(Ca)增加效应不能被胞外无钙液(含依他酸10 μmol/L)和L-型钙通道阻断剂尼卡地平5μmol/LL所阻断.SNP100μmol/L可以明显地抑制钙电流.SNP引发STOC增加效应可以明显地被三磷酸肌醇受体特异性阻断剂肝素3 g/L所阻断,却不能被兰尼碱10μmo1/L所阻断.亚甲基蓝1 μmol/L,特异性胞内鸟苷酸环化酶抑制剂,也可以显著地抑制上述效应.结论:SNP引发钙敏感性钾电流的增加可能是胞内第二信使cGMP通过激活胞内三磷酸肌醇诱导的钙释放的途径而实现的,而胞外钙离子不参与这一过程.
