靶向HBV X基因的shRNA表达质粒对HBV复制的抑制作用

目的 观察靶向HBVX基因的RNA干扰(RNAi)对HBV复制的抑制作用.方法 选择HBV基因组X区的Nt1681-1708作为靶序列,合成相应的正、反义寡核苷酸,退火后形成双链,克隆入shRNA表达质粒,将得到的质粒与HBV质粒共转染HepG2细胞,观察HepG2细胞中HBsAg、HBeAg、HBV DNA和pgRNA的受抑制情况.结果 HBsAg、HBeAg的表达、HBV DNA和pgRNA的拷贝数均明显受到抑制.结论 所选靶区通过RNAi可有效抑制HBV复制.

HBeAg与CD81分子结合的研究

目的: 研究HBeAg与CD81分子在细胞内、外的相互作用.方法: 应用RT-PCR技术, 从HepG2细胞中扩增CD81全基因, 并构建重组真核表达载体.将其与pGBKT7-eAg共转染营养缺陷型酵母细胞, 观察生长情况.应用网织红细胞裂解体外翻译及免疫共沉淀试验, 进一步验证CD81分子与HBeAg的结合. 结果: 经EcoR I和BamH I酶切和DNA序列测定鉴定表明, 构建的CD81基因的重组表达载体正确.共转染后的酵母细胞在营养缺陷的培养基中生长良好.体外免疫共沉淀试验证实, CD81与HBeAg出现沉淀带. 结论: HBeAg与CD81分子在细胞内、外均可结合, 推测CD81在HBV的致病过程中起着重要的作用.

RNA干扰体外抑制HBeAg的表达

目的:构建乙型肝炎病毒前C/C基因小发夹RNA(shRNA)表达载体,探索shRNA表达载体对HBeAg表达的抑制作用.方法:用基因重组技术构建shRNA表达载体,经酶切、测序鉴定后,与HBeAg表达载体pcDNA3.1-preC/C按7:1的比例,共转染HeLa细胞,采用半定量PCR和微粒子酶免疫试验（MEIA）分析shRNA表达载体对HBeAg表达的抑制情况.结果:经限制性内切酶、测序证实成功构建shRNA表达载体;筛选到psiHBV2载体对HBeAg表达有一定抑制作用,对mRNA的抑制率为75%,对蛋白质的抑制率为53%,其余两序列无明显抑制作用.结论:RNAi技术可以有效抑制载体pcDNA3.1-preC/C表达 HBeAg.

慢性乙型肝炎患者血清HBsAg定量检测及其临床意义

目的 定量检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清HBsAg和HBV DNA水平并分析其相互关系,探讨定量检测HBsAg的临床应用价值.方法 选取HBeAg阳性CHB患者41例,HBeAg阴性CHB患者29例,采用全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)等生化指标,采用化学发光分析仪定量检测血清HBsAg滴度,采用PCR仪检测血清HBV DNA载量.结果 HBeAg阳性CHB患者血清HBsAg滴度略高于HBeAg阴性患者(P=0.064),两组患者HBsAg/HBV DNA比值差异无统计学意义.CHB患者血清HBsAg与HBV DNA总体相关(P=0.002),随着HBV DNA载量上升,血清HBsAg也明显上升(x2=6.989,P=0.002); HBeAg阳性患者血清HBsAg与HBV DNA水平呈正相关(r=0.383,P=0.015),而HBeAg阴性患者HBsAg与HBV DNA无相关性.结论 血清HBsAg与HBV DNA总体相关,但在HBeAg不同状态患者血清中HBsAg滴度及其与HBV DNA的相关性差异均有统计学意义,这些发现对于将HBsAg定量检测作为临床指标具有实际意义.

血清HBsAg、HBeAg和抗-HBc定量检测在慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗中的临床意义

聚乙二醇干扰素α-2a治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎实现HBsAg血清转换1例

患者,男性,55岁,发现HBsAg阳性10余年.无心脏病、糖尿病、脂肪肝,无乙型肝炎(乙肝)家族史,未合并其他肝炎病毒感染.2004年7月14日确诊为病毒性肝炎,乙型,慢性,轻度;HBV DNA分型C型.患者于2004年7月查肝功能丙氨酸氨基转移酶(ALT) 228 U/L,总胆红素(TB IL) 15μmol/L,HBVDNA＞107拷贝/ml,在医生建议下开始使用拉米夫定(LAM)治疗.

Pre-S1抗原联合“乙肝两对半”检测在临床的应用价值

目的:分析乙型肝炎病毒( HBV) Pre-S1抗原与血清“五项”标志物、HBV-DNA的关系,探讨Pre-S1抗原在临床肝病诊断及健康体检中的应用价值.方法:采用酶联免疫吸附试验( ELISA)方法,测定204例肝病患者及体检者血清“五项”标志物和Pre-S1抗原,荧光定量法测定HBV -DNA,并与前两者比较,对其结果进行分析.结果:在108例HBS-Ag阳性患者血清中检出Pre-S1和HBV-DNA的阳性率为75.92％和75.92％,Pre-S1和HBV-DNA的检出符合率达100％;在60例HBS-Ag、HBE-Ag、抗-HBC阳性的标本中检出Pre-S1和HBV-DNA的阳性率为86.67％和90.0％,Pre-S1和HBV-DNA的检出符合率达96.3％;在46例HBs-Ag、抗-HBe、抗-HBc阳性的标本中检出Pre-S1和HBV-DNA的阳性率为60.87％和58.69％,Pre-S1和HBV - DNA的检出符合率为96.4％;在83例Pre-S1阳性患者的标本中检出HBV-DNA和HBE-Ag阴性的标本分别有8例和29例,各占9.64％和34.94％.结论:Pre-S1抗原和HBV-DNA高度相关;Pre-S1抗原能够较好的反映乙肝病毒的复制情况,对病情的预后及疗效判断有指导意义; Pre-S1可补充HBE-Ag和HBV-DNA的检测,纳入健康体检和献血员筛查的检测项目.