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阴离子脂质体介导的腺病毒/卡莫司汀共转运系统载药量测定
目的 建立一套有效可靠的检测方法,以测定阴离子脂质体介导的腺病毒和化疗药卡莫司汀共转运载体系统中腺病毒和卡莫司汀的含量.方法 以钙离子融合法制备共转运载体复合物；根据腺病毒(Ad5)的hexon基因序列设计用于Taqman探针荧光定量聚合酶链式反应(PCR)的引物和探针序列,优化反应体系,从而准确测定腺病毒含量；优化色谱条件,建立针对共转运载体复合物检测卡莫司汀含量的高效液相色谱法.结果 以荧光定量聚合酶链式反应法测得共转运载体复合物中腺病毒载药量为(23.2±1.8)％；高效液相色谱法测得卡莫司汀在共转运载体复合物中的载药量为(55±2.8)％.结论 本实验成功建立了分别用于测定共转运载体系统中腺病毒和卡莫司汀含量的荧光定量聚合酶链式反应和高效液相色谱法；这两种检测方法操作简便、准确可靠,具有一定的普遍适用性.
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介孔硅纳米微粒共转运阿霉素和shRNA对耐药口腔鳞癌细胞株的作用
目的：考察介孔二氧化硅纳米微粒(mesoporous silica nanoparticle，MSNP)共转运体系逆转肿瘤多药耐药、杀伤肿瘤细胞的效果，证实阿霉素（doxorubicin，DOX）与MDR1shRNA共同应用具有协同抗肿瘤作用。方法：首先采用溶胶-凝胶法制备MSNP，通过表面修饰阳离子聚合物聚乙烯亚胺（polyethylenimine，PEI）使其带有正电荷，能够与带负电的MDR1shRNA相结合，同时将抗肿瘤药物DOX吸附于介孔内部，形成载药、载基因的共转运体系。体外采用紫外可见光分光光度法测定载药量；通过MTT法测定DOX对口腔鳞癌细胞株KB及耐药株KBV的半抑制浓度IC50；使用荧光显微镜、流式细胞仪测定转染效率；应用Real-Time PCR技术检测MDR1基因的表达水平；AnnexinV-FITC/7-AAD双染法经流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：纳米粒度仪、透射电镜测得所合成的MSNP尺寸为100~200 nm，表面介孔直径约3~5 nm，分散性较好，尺寸较均一；紫外分光光度计法测得IC50(KB-DOX)=182.9 ng/mL、IC50(KBV-DOX)=9233.5 ng/mL，计算耐药株KBV的耐药倍数为50.483871倍；荧光显微镜、流式细胞仪测得转染效率为6.73％；Real-Time PCR结果显示：与单纯载药、载基因组相比，双载组MDR1基因的表达水平显著下调；Annex-inV-FITC/7-AAD双染法经流式细胞仪测得单纯载药、单纯载基因组细胞凋亡率分别为12.74％、10.08％，而双载组细胞凋亡率增加到25.68％。结论：介孔二氧化硅纳米微粒共转运体系能够有效逆转肿瘤多药耐药，与单纯载药、载基因组相比，同时应用DOX与MDR1shRNA具有协同抗肿瘤作用。
关键词： 介孔二氧化硅纳米微粒 共转运 DOX MDR1shRNA
