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益寿消渴茶质量标准问题探讨
益寿消渴茶由绿茶、人参、知母、葛根等十二味药组成,具有滋阴补肾、益气生津之功效.按现行质量标准检验,人参、黄芪的薄层色谱鉴别背景干扰大,知母薄层色谱鉴别的特征斑点不明显;含量测定项高效液相色谱的洗脱时间太长,基线难以归零,含量测定结果偏低.本文针对上述存在的问题进行了实验研究,取得了满意的效果,现报道如下:
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随机噬菌体肽库筛选血型D抗原模拟多肽方案的建立及初步验证
目的 探讨随机噬菌体十二肽库筛选血型D抗原模拟多肽的影响因素,以建立佳筛选方案.方法 对比洗脱时间分别为4、8、12、16和30 min的洗脱液滴度;3轮清洗缓冲液中Tween 20浓度分别为0.1％、0.2％、0.5％和分别为0.1％、0.5％、0.5％时每轮淘洗的投入/产出比,以及3轮封闭缓冲液均为0.5％ BSA和分别为0.5％ BSA、1％明胶、5％脱脂奶时每轮淘洗的投入/产出比,以分析筛选效果,得出佳筛选方案.对采用佳筛选方案筛选得到的阳性克隆测定其DNA序列和做抗体竞争抑制试验检测D抗原模拟表位.结果 洗脱8 min时洗脱液滴度为(2.3t±0.25)×106 pfu/mL,洗脱4、12、16和30 min时的洗脱液滴度与之相比明显下降(P＜0.01).当洗脱时间为8 min且3轮封闭缓冲液均为0.5％ BSA时,3轮淘洗清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.5％、0.5％时投入/产出比分别为1.69×107、4.95×105、9.58×102,与清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.2％、0.5％时投入/产出比分别为2.70×107 、4.57 × 105、1.14×103相比,对筛选效果影响不大.当洗脱时间为8 min且3轮淘洗清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.5％、0.5％时,3轮封闭缓冲液分别为0.5％BSA、1％明胶、5％脱脂奶时投入/产出比分别为1.93×107、6.44×103、6.23×101,明显优于3轮淘洗封闭缓冲液均为0.5％ BSA时的投入/产出比(分别为1.94×10 7、1.66 × 105、8.23×102).通过优化方案筛选得到1个抑制率约为50％的十二肽序列“VHWDFRQW-WQPS".结论 洗脱时间、清洗缓冲液成分以及封闭缓冲液类型对筛选效率有一定影响.洗脱时间为8 min,3轮淘洗的清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.5％、0.5％和3轮淘洗的封闭缓冲液分别为0.5％ BSA、1％明胶、5％脱脂奶粉时,筛选效果较优,可获得较理想的血型D抗原模拟多肽.
