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浅低温体外循环手术前后基因表达研究中内参基因的选择
目的 筛选浅低温体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)手术前后基因表达变化研究的内参基因.方法 通过阅读文献选择基因表达研究中常用的11个管家基因(housekeeping genes,HKGe),采用Beacon Designer软件设计PCR引物;收集4例浅低温CPB辅助手术患者CPB前、体温低点、CPB末以及术后1d、3d、7d的静脉血24份,提取总RNA,采用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR法检测各样品中11个HKGe的循环阚值;对所得循环阈值进行转换,采用geNonn程序对候选基因的表达稳定性和所需内参基因数量进行分析.结果 11个HKGs稳定性排序为:UBC
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大鼠心肌梗死模型中管家基因的选择
目的 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)广泛应用于基因表达分析,其中选择合适的管家基因非常重要.大鼠心肌梗死模型是心肌梗死相关研究的主要动物模型,而心肌梗死后大鼠管家基因选择问题研究报道则较少.本研究拟探讨大鼠心梗模型中管家基因表达的稳定性.方法 结扎冠脉前降支制作心梗模型,分析并挑选出使用广泛的4个标准管家基因:3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),核糖体蛋白L13A(RPL 13A),β-肌动蛋白(ACTB),结合区连接蛋白(ARBP);用实时荧光反转录-聚合酶链反应方法比较它们在心梗大鼠心脏中的表达,采用GeNorm程序分析适于心肌梗死后大鼠基因表达管家基因研究.结果 RPL13A、GAPDH、ARBP及ACTB基因表达稳定度的平均值(M值)分别为0.812、0.721、0.812和1.2.结论 GAPDH及ARBP是大鼠心梗模型中表达稳定的基因.
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大鼠原代脑微血管内皮细胞氧糖剥夺/复氧模型中内参基因的选择
目的 筛选大鼠原代脑微血管内皮细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型中合适的内参基因.方法 实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3种常用管家基因:3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、β-肌动蛋白(ACTB)、核糖体蛋白L13A(RPL13A)在大鼠原代脑微血管内皮细胞中的表达水平;并采用GeNorm程序分析得到稳定的内参基因.结果 RPL13A、GAPDH、ACTB基因表达稳定度的平均值(M值)分别为0.590、0.570、0.397.结论 在大鼠原代脑微血管内皮细胞OGD/R模型中表达不稳定的内参基因是RPL13A,稳定内参基因是ACTB.
