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ELISA法测定血清Ⅳ型胶原
目的建立一种测定血清Ⅳ型胶原(CⅣ)的夹心ELISA法.方法分别制备Ⅳ型胶原的多抗和单抗,正辛酸-硫酸铵沉淀法纯化,用改良过碘酸钠法标记单抗.采用多抗包板,单抗标酶,建立测定血清CⅣ的双抗夹心ELISA法.结果该法灵敏度为22.0μg/L,线性范围为31～1000μg/L.本法的批内和批间变异系数分别为5.2%和11.8%,平均回收率为96%.与进口试剂盒相比相关性良好.临床应用结果可信.结论本法灵敏、准确、简便,便于临床推广使用.
关键词： Ⅳ型胶原 双抗夹心酶联免疫吸附法 -
妊娠期高血压疾病血清中HGF、AngⅡ水平的变化及意义
目的 检测妊娠期高血压疾病孕妇血清肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平,探讨二者变化的意义.方法 采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定72例妊娠期高血压疾病孕妇和23例正常妊娠孕妇血清HGF、AngⅡ水平.结果 妊娠期高血压组[(145.7±17.2) pg/mL]、子痫前期组[(141.6±16.0)、(135.0±14.3) pg/mL]血清HGF水平较对照组[(211.6±20.8) pg/mL]降低(P < 0.01);妊娠期高血压组[(97.5±11.0)ng/mL]、子痫前期组[(119.7±13.9)、(135.4±19.2)ng/mL]血清AngⅡ水平较对照组[(45.6±9.4) ng/mL]明显升高(P < 0.01),妊娠期高血压组、轻度子痫前期、重度子痫前期血清AngⅡ水平逐次升高,组间比较差异有统计学意义(P < 0.05).结论 妊娠期高血压疾病孕妇血清HGF水平降低,血清AngⅡ水平逐渐升高,提示二者可能参与了妊娠高血压疾病的发生和发展.
关键词： 妊娠期高血压疾病 血清 双抗夹心酶联免疫吸附法 血清肝细胞生长因子 血管紧张素Ⅱ -
单抗制品中CHO细胞宿主蛋白残留双抗夹心ELISA检测方法的建立
目的 建立单抗制品中CHO细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)残留双抗夹心ELISA检测方法.方法 确定双抗夹心ELISA方法的佳工作条件,并对该方法的精密度和准确度进行验证,确定线性范围及低检出限;用建立的方法与市售试剂盒分别检测低、中、高浓度HCP标准品及抗TNF-ct单抗原液、抗VEGF单抗纯化工艺样品中的HCP.结果 建立的双抗夹心ELISA法佳抗体包被浓度为1.5μg/ml,酶标抗体浓度为1μg/ml,160 r/min,37℃孵育2.5h;TMB 37℃孵育15 min;以630 nm为参比波长,450 nm为测定波长.该方法的线性范围为3.125 ～100 ng/ml,低检测限为3.125 ng/ml;试验内变异系数(CV)和试验间cv均小于15％,回收率为85.3％ ～ 115.1％.与商品化试剂盒检测结果基本一致,可用于检测纯化工艺样品.结论 已成功建立单抗制品中CHO细胞HCP残留双抗夹心ELISA检测方法,该方法可代替市售试剂盒用于CHO细胞HCP残留检测,可使检测成本降低30倍.
关键词： CHO细胞 宿主蛋白 双抗夹心酶联免疫吸附法 -
酶联免疫荧光法与双抗夹心酶联免疫吸附法测定屋尘螨组分IgG4的比较
目的 运用酶联免疫荧光法(UniCAP法)和双抗夹心酶联免疫吸附法(Fooke法)分别测定经特异性免疫治疗(SIT)的患儿血清sIgG4水平,评价两种免疫定量检测方法的相互关系.方法 对45例成功进行皮下SIT的患儿血清分别用UniCAP法和Fooke法检测治疗前、治疗6 ~8 个月后、治疗12 ~14 个月后sIgG4 水平.结果 与治疗前相比较,在治疗6~8个月和治疗12~14个月后,UniCAP法检测45例患儿血清sIgG4水平全部均有不同程度升高,Fooke法在SIT后6~8个月和12~14个月后分别有40和43例患儿sIgG4水平有不同程度升高,但两种方法检测sIgG4结果升高幅度有差异.结论 对于sIgG4测定,SIT后,UniCAP法比Fooke法测定值升高的幅度更明显.
关键词： sIgG4 酶联免疫荧光法 双抗夹心酶联免疫吸附法
