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红细胞生成素对肾小管上皮-间充质细胞转化的抑制作用及其与VEGF表达变化的关系
目的 探讨红细胞生成素(rHuEPO)对人肾小管上皮细胞(HKC)上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与该细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达变化的关系.方法 体外培养HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/ml的转化生长因子-β1(TGF-β1)处理的HKC为阳性对照,以不同浓度(0.1、1.0、10、50、100 IU/ml)的rHuEPO与8ng/ml的TGF-β1共同处理HKC,或在不同时间(-24、0、12、24、36 h)用同一浓度rHuEPO(100 IU/ml)对8ng/ml的TGF-β1处理的HKC进行干预.应用RT-PCR方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和VEGFmRNA转录水平,应用免疫印迹方法检测α-SMA、E钙黏蛋白以及VEGF的蛋白表达水平.结果 rHuEPO以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的HKC α-SMA mRNA和蛋白的表达(P＜0.05或P＜0.01),保护性上调TGF-β1抑制的HKC细胞E钙黏蛋白的表达(P＜0.05或P＜0.01);同时上调TGF-β1抑制的HKC细胞VEGF mRNA和蛋白的表达(P＜0.05或P＜0.01).结论 rHuEPO对TGF-β1诱导的EMT具有一定的抑制作用,并具剂量一时间依赖性;该作用可能与rHuEPO上调肾小管上皮细胞VEGF的表达有关.
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血管内皮生长因子对肾小管上皮-间充质细胞转化的作用及其与骨形成蛋白-7、分化抑制因子表达的关系
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)对肾小管上皮一问充质细胞转化(EMT)的作用及其与骨形成蛋白-7(BMP-7)、分化抑制因子(Id)2、Id3表达的关系.方法 体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)经转化生长因子-β1(TGF-β1,5 ng/ml)与不同浓度VEGF165(0.1、1、10、100 ng/ml)共同作用,或TGF-β1(5 ng/m1)与血管内皮生长因子受体-1(VEGFRl)抗体(10μg/ml)共同作用48 h后,免疫组织化学双染方法 检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素表达,实时荧光定量PCR法、Western blot法检测细胞α-SMA、BMP-7、Id2和Id3的表达.TGF-β1(5ng/ml)、VEGF165(100 ng/ml)与激活素受体样激酶-6/Fc嵌合体(Alk6/Fc Chimera)(2 μg/ml,中和内源性BMP-7)共同作用48 h后,Western blot法检测细胞α-SMA、Id2的表达情况.结果 TGF-β1作用后,β-SMA表达比正常对照显著增强(P＜0.05),E-钙黏素、BMP-7、Id2及Id3的mRNA及蛋白质表达均显著减弱(P＜0.05).VEGF165以浓度依赖方式增强BMP-7及Id2蛋白表达,而显著降低TGF-β1上调α-SMA表达的作用(P＜0.05).加入VEGFR1抗体(10μg/ml)后,TGF-β1上调α-SMA表达的作用显著增强(P＜0.05),而E-钙黏素、BMP-7、Id2表达显著减弱(P＜0.05).TGF-β1+VEGF165+Alk6/Fc Chimera共同作用后α-SMA蛋白表达比TGF-β1+VEGF165共同作用后显著增强(P＜0.05),而Id2表达差异无显著性.结论 VEGF165可抑制TGF-β1诱导HK-2细胞发生EMT;其机制可能与BMP-7和Id2表达上调有关,而与Id3表达变化无关.Id2表达增强可能与VEGF165的直接作用有关,而与BMP-7无关.
关键词： 血管内皮生长因子 上皮-间充质细胞转化 骨形成蛋白7 分化抑制冈子 -
特发性肺间质纤维化中TGF-β1诱导上皮-间充质细胞转化的研究
目的 探讨转化生长因子-β1(tansforming growth factor-β1,TGF-β1)在特发性肺间质纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)中上皮-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用和机制.方法 选择临床-影像-病理诊断的IPF患者25例肺石蜡组织制作组织芯片,应用免疫组化方法检测病灶组织中TGF-β1和β连环蛋白(β-catenin),间质标记物α-SMA、Desmin、Vim和上皮标记物E-cadherin及CK7的分布及表达情况.结果 TGF-β1主要分布于肌纤维母细胞、Ⅱ型肺泡上皮细胞和巨噬细胞,且其在成纤维细胞灶(fibroblast foci,FF)区域内各种细胞中的表达明显高于无FF区域(P＜0.01)；与无FF区域相比,β-catenin和E-cadherin在有FF区域增生的Ⅱ型肺泡上皮细胞膜表达明显减弱(P＜0.01),而胞浆的表达明显增加(P＜0.01)；同时发现有FF区域Ⅱ型肺泡上皮细胞表达间质标记物Vim,但未发现α-SMA的表达,而无FF区域两者均无表达.结论 TGF-β1和β-catenin有可能通过相互交叉作用诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT,从而参与肺间质纤维化的发生.
关键词： 特发性肺间质纤维化 上皮-间充质细胞转化 转化生长因子-β1 -
TGF-β1诱导Ⅱ型肺泡上皮-间充质转化及ERK1/2信号系统的变化
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对Ⅱ型肺泡上皮-间充质转化的作用及与胞外调节激酶1/2(ERK1/2)信号系统的关系.方法 体外培养人Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞,分为阴性对照组和TGF-β1处理组(0.05、0.5、5、10 μg/L,作用时间48 h).免疫荧光及Western blot方法检测各组细胞E钙粘素(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vim)和纤维连接蛋白(Fn)的表达.在TGF-β1作用不同时间,采用Western blot及RT-PCR方法检测各组细胞α-SMA、E-cad、Vim、Fn、ERK1/2和p-ERK1/2的表达.结果 与阴性对照组比较,TGF-β1组(5μg/L)α-SMA、Vim、Fn蛋白表达显著升高,而E-cad表达显著降低(P＜0.05).作用6h后,TGF-β1组出现α-SMA mRNA表达显著升高,E-cad显著下降(P＜0.05).作用48 h后,TGF-β1组出现Vim、Fn蛋白表达显著升高,E-cad显著下降(P＜0.01).作用30 min后,TGF-β1组ERK/2磷酸化水平显著升高(P＜0.05).结论 TGF-β1可在体外以浓度和时间依赖方式的诱导A549细胞发生上皮-间充质转化,其机制可能与上调ERK1/2信号转导通路有关.
关键词： 转化生长因子β1 上皮-间充质细胞转化 胞外调节激酶1/2 -
TRIM31沉默抑制胰腺癌侵袭和迁移
目的:探讨三结构域蛋白31(TRIM31)对胰腺癌侵袭转移的影响及其机制.方法:利用基因表达数据库(GEO)获得TRIM31在胰腺癌组织、癌旁组织以及正常胰腺组织中的表达,选取两株胰腺癌细胞Panc-1及MIAPaCa-2分别分为TRIM31沉默组(实验组)和空载体组(阴性对照组),通过Transwell小室细胞迁移和划痕实验观察TRIM31对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,Western blot实验检测上皮-间充质细胞转化(EMT)相关钙黏附蛋白E (E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平.结果:正常胰腺组织中TRIM31 mRNA相对表达量明显低于胰腺癌组织,癌旁组织中TRIM31 mRNA相对表达量明显低于癌组织,差异有统计学意义(P＜0.05);小室细胞迁移和侵袭实验显示,实验组Panc-1及MIA PaCa-2迁移和侵袭细胞数明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);沉默TRIM31表达后,Panc-1及MIAPaCa-2细胞中E-cadherin蛋白表达量明显升高,Vimentin蛋白表达量明显降低.结论:沉默TRIM31的表达可能通过抑制胰腺癌细胞的EMT过程,进而抑制其侵袭迁移.
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锌离子转运蛋白LIV-1的研究进展
LIV-1（solute carrier family 39 member 6，SLC39A6/ZIP6）是锌转运蛋白ZIP家族中LZT（LIV-1 subfamily of ZIP zinc Transporters）亚家族成员之一，定位于细胞膜，富含组氨酸，并包含有多个跨膜结构域，主要分布于受激素调控的组织中。LIV-1的主要功能是将Zn2﹢转运至细胞质基质中从而提高基质内Zn2﹢的含量，此外研究表明，LIV-1还参与胚胎发育以及肿瘤迁移中所涉及的上皮-间充质细胞转化过程（ epi-thelial-to-mesenchymal transition，EMT），提示除与锌离子运输外，它可能与肿瘤等多种疾病的发生发展也有着密切地联系。本文将对锌转运蛋白LIV-1的相关研究进展进行综述。
关键词： LIV-1 锌离子转运蛋白 上皮-间充质细胞转化 肿瘤迁移
