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血管组织细胞抽提物体外调控间质干细胞向内皮细胞分化的研究
目的 探讨血管组织细胞抽提物对大鼠骨髓间质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cell MSC)体外培养的影响及向血管内皮细胞分化的能力. 方法 利用淋巴细胞分离液分离大鼠MSCs,经贴壁法培养扩增后,流式细胞仪检测MSCs表面抗原表达,然后分别以含有大鼠血管组织细胞抽提物、热处理血管组织细胞抽提物以及用磷酸缓冲液代替细胞抽提物的培养基培养,然后分析比较细胞表型变化及检测内皮细胞特异性标志物的表达变化. 结果 MSCs在含有大鼠血管组织细胞抽提物的培养基中细胞形态没发生显著变化,但是细胞内基因表达变化发生改变,内皮细胞特异性基因CD31、CD34,CD144和eNOS(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)高表达. 结论 血管组织细胞抽提物中含有可诱导大鼠MSCs向内皮细胞分化的物质,说明成体细胞内组份对邻近干细胞的分化命运有着重要的调控作用.
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人乳腺上皮细胞抽提物重编程人脂肪来源干细胞的实验研究
目的 观察人乳腺上皮细胞抽提物重编程人脂肪来源干细胞(hADSCs),使其向上皮细胞转化的可行性.方法 采用胶原酶消化法分离并获得脂肪来源干细胞;将超声乳化人乳腺上皮细胞离心后获得抽提物冻存备用;培养第3代hADSCs,链球菌溶血素O(SLO)处理后,实验组6例加入乳腺上皮细胞抽提液,对照组6例不加乳腺上皮细胞抽提液.细胞培养过程中观察hADSCs的形态学变化,采用蛋白质印迹法检测卵透明带蛋白1(ZO1)和细胞角蛋白18(CK18)表达的变化.结果 流式细胞仪检测结果显示,人脂肪组织分离培养的干细胞表达CD13、CD29、CD44、CD90和CD105呈阳性表达,而不表达CD45.实验组细胞重编程后第16天,细胞形态开始转变为上皮样的圆形;第18天蛋白印迹法检测上皮细胞抗原标志物ZO1和CK18表达增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人乳腺上皮细胞抽提物可以重编程脂肪来源干细胞,使其向上皮细胞转化.
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表皮干细胞抽提物重编程脂肪干细胞表达表皮细胞表型的实验研究
目的 研究富集的表皮干细胞(Keratinocyte enriched with epidermal stem cells,KSC)抽提物对重编程人脂肪干细胞(Adipose derived stem cells,ASCs)表达表皮细胞表型的影响.方法 常规方法收集表皮细胞(Keratinocyte,KC)后,应用Ⅳ型胶原差速贴壁法分别收集KSC与富集后剩余的表皮细胞(Keratinocyte enriched with epidermal stem cells left,KCL),鉴定K19和P63的阳性表达率,Gimsa染色法测定KC 、KSC、KCL的克隆形成率,分别制备KC、KSC、KCL 的细胞抽提物,作用于链球菌溶血素-O(SLO)通透处理过的原代ASCs,分别应用流式细胞仪与Western-blot测定重编程后ASCs中广谱角蛋白(Pan cytokeratin,P-CK)与ASCs的BRG1表达变化.结果 KSC与KC、KCL来源的细胞抽提物重编程ASCs的CK及BRG1表达率,均有明显统计学差异(P＜0.01).结论 脂肪干细胞在表皮细胞抽提物的诱导作用下能表达表皮细胞表型,且对表皮细胞优化处理后的KSC有更加显著的重编程作用.
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作者声明
《组织工程与重建外科》杂志第九卷第3期上刊发的《表皮干细胞抽提物重编程脂肪干细胞表达表皮细胞表型的实验研究》一文，系由国家自然科学基金项目资助，课题编号：81071580。特此声明。
