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屏障系统内T739小鼠管理和科学饲养的探究
结合天津市医药科学研究所动物实验室的实际,以T739小鼠为例,讨论屏障系统内的饲养管理和繁育方法的经验,加强和完善屏障系统内实验动物的管理制度和质量控制.参照国家有关实验动物标准,建立一套行之有效的屏障系统实验室管理规范,为更好地研究、发展T739小鼠品系奠定基础.
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小剂量环磷酰胺治愈荷膀胱癌小鼠动物模型的建立
[目的]建立单一剂量环磷酰胺(cyclophosphamide, CTX)治愈荷膀胱癌小鼠的动物模型.[方法]T739小鼠皮下接种小鼠可移植性膀胱移行细胞癌组织建立荷瘤小鼠模型.肿瘤接种后第7天,不同剂量的CTX单次腹腔内注射,观察荷瘤小鼠用药后体重和肿瘤结节直径的变化,找出CTX可治愈多数荷瘤小鼠的低有效剂量.然后再取12只荷瘤T739小鼠随机分成两组,低有效剂量的CTX单次腹腔内注射,等量生理盐水作对照,分别在治疗后第4、14天内眦静脉取血进行白细胞计数.[结果]接种2mm3的小鼠膀胱癌肿瘤组织可使T739小鼠肿瘤进行性生长,接种后第7天肿瘤直径约为2～4mm.15～400mg/kg的CTX单次腹腔内注射后1周内,荷瘤小鼠肿瘤结节缩小的速率和毒性反应均与所用CTX的剂量呈正相关.CTX治疗后2月,100～200mg/kg CTX治疗组的荷瘤小鼠全部死亡;40mg/kg CTX治疗后20%的荷瘤小鼠存活;15mg/kg CTX治疗组60%的荷瘤小鼠存活,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01).15 ms/kg CTX治疗后第4天荷瘤小鼠外周血WBC为(11.36±0.30)×109/L,对照组为(11.14±2.14)×109/L,两组数据比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后第14天,治疗组小鼠WBC计数降为(8.46±0.76)×109/L,与CTX治疗后第4天WBC计数比较差异具有统计学意义(P<0.05),但与对照组(9.86±3.40)×109/L比较差异无统计学意义(P>0.05).[结论]15mg/kg CTX单次腹腔内注射后荷瘤小鼠无明显毒性反应,并可使多数荷瘤小鼠肿瘤治愈,因此,小剂量CTX治愈荷膀胱癌小鼠模型成功建立.
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TNP-470联合重组人内皮抑素抑制小鼠肺腺癌生长的研究
目的:观察TNP-470和重组人内皮抑素(recombinant human endostatin,rhES)联合治疗对小鼠肺腺癌LA795肿瘤生长的抑制作用.方法:用甲醇诱导能高效分泌表达重组人内皮抑素(rhES)的毕赤酵母菌株分泌表达rhES,将皮下接种LA795肺腺癌细胞的T739雄性近交系小鼠随机分成3组,每组各10只,分别给予PBS,rhES及TNP-470+rhES皮下注射,每日1次,连续14 d;观察各组小鼠肿瘤生长情况,游标卡尺测量肿瘤体积大小.断颈处死小鼠,原位肿瘤免疫组化观察肿瘤内部微血管密度(microvessel density,MVD).结果:经甲醇诱导,毕赤酵母重组菌分泌表达rhES,并应用肝素亲和层析将其纯化;动物试验显示与PBS对照组比较,rhES治疗组及rhES+TNP-470治疗组均明显抑制小鼠肿瘤的生长(P＜0.01),TNP-470+rhES组与rhES组比较亦有显著性差异(P＜0.01).原位肿瘤免疫组化显示联合治疗组抑制血管生成更显著(P＜0.01).结论:TNP-470联合rhES治疗对小鼠肺腺癌LA795生长的抑制效果比单独使用rhES的治疗效果更佳,具有良好的协同治疗作用.
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内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795生长和转移抑制作用的初步研究
目的：观察人内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用。方法：对重组人内皮抑素高效表达克隆pCX的表达产物进行纯化，得到重组人内皮抑素(rhES)。用亲和层析及胰弹性蛋白酶消化法从过期人血浆纯化得到人血管抑素(hAS)。将接种LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成3组，分别给予rhES，hAS或等体积PBS皮下注射，1次／日，共14 d。观察3组肿瘤生长情况、肺湿重、肺表面转移结节数、动物生存期，分别进行q检验。结果：rhES组及hAS组肿瘤生长缓慢，8d后肿瘤逐渐回缩；肺湿重、肺表面转移结节数明显减少，动物生存期明显延长。结论：rhES与hAS均可明显抑制LA795所致的小鼠实验性肿瘤的生长与转移，延长动物的生存期。
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重组人白介素-2抑制小鼠LA795肺腺癌高转移株肺转移的研究
目的:探讨不同剂量的重组人白介素-2抑制LA795肺腺癌高转移株皮下肿瘤生长及肺转移的作用.方法:皮下接种LA795肺腺癌高转移株于T739同系小鼠,腹腔注射不同剂量的重组人白介素-2,观察抑制肿瘤生长及肺转移的作用.结果:rhIL-2 1.5×105U/d能明显地抑制肿瘤生长.肿瘤体积,瘤体湿重以及肺转移结节数较对照组小和少,抑制率分别达66.03%、76.03%、97.54%(P＜0.01).小剂量rhIL-2 2.6×103U/d,抑制肿瘤生长的抑制率仅为5.13%(P＞0.05),而对肺转移有68.75%的抑制率(P＜0.01).结论:大剂量的rhIL-2仅能有效地抑制LA795肺腺癌的肺转移,且能较好地抑制肿瘤生长.小剂量的rhIL-2仅对LA795肺腺癌转移有一定的抑制作用.因此rhIL-2治疗肿瘤应使用大剂量.
关键词： 重组人白介素-2 肺腺癌高转移株(LA795) 肺转移 T739小鼠 -
建立小鼠膀胱肿瘤原位模型的一种新方法
目的建立一种简单、实用的小鼠膀胱肿瘤动物模型.方法将绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒导入膀胱癌细胞株BTT-T739,筛选出高表达GFP的细胞克隆并配置成细胞悬液.将一定浓度肿瘤细胞悬液经雌性同系小鼠尿道注入膀胱壁粘膜层.荧光显微镜观察肿瘤浸润生长及微转移,常规病理切片观察.与同时建立的经腹膀胱壁内注射肿瘤模型进行对比.结果经尿道种植膀胱肿瘤细胞(4×105个)1周后可见膀胱粘膜层肿瘤细胞生长,而经腹膀胱壁内注射产生的肿瘤多在膀胱浆膜层及肌层.随时间延长膀胱内肿瘤逐渐增大,并出现血尿及远处转移的表现.结论经尿道膀胱壁注射肿瘤细胞建立膀胱癌模型的方法简单、实用、迅速.用该方法建立的模型更符合人类膀胱肿瘤的病理过程,有望成为研究膀胱肿瘤更为有效的工具.
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毕赤酵母表达重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用
背景与目的:肿瘤的生长和转移有赖于新生血管的生成,内皮抑素能抑制肿瘤的血管生成.本研究旨在观察毕赤巴斯德酵母(pichia.pastoris.GS115)分泌表达的重组人内皮抑素(recombinant human endostatin,rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用.方法:挑取一株高效分泌表达rhES的毕赤巴斯德酵母菌株,利用甲醇进行大量诱导表达;用肝素亲和层析的方法纯化目的蛋白;将接种LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成两组,分别给予rhES和PBS皮下注射,每日1次,连续14天;观察两组小鼠肿瘤生长情况,测量肿瘤体积大小,并观察两组小鼠肿瘤肺部转移情况.结果:经甲醇诱导的毕赤巴斯德酵母菌株高效分泌表达了rhES;动物实验研究发现rhES能显著抑制小鼠肺腺癌LA795的生长,rhES治疗组肿瘤大小与对照组比较具有显著性差异(P<0.001),抑瘤率达到66.4%,并且有效抑制了肿瘤的肺部转移.结论:利用毕赤酵母作为宿主分泌表达的rhES具有良好的生物学活性,可显著抑制小鼠肺腺癌LA795的生长和转移.
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重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌肿瘤血管生成及肺转移的抑制作用
目的观察酵母表达重组人内皮抑素(recombinanthuman endostatin,rhES)对小鼠肺腺癌LA795原位肿瘤微血管生成及肺转移的抑制作用.方法对含有人内皮抑素基因的重组酵母菌株进行诱导表达及纯化rhES;将接种LA795小鼠肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成两组,每组各10只,于接种后第6日起给予rhES和磷酸缓冲盐液(PBS)皮下注射,每日1次,连续14 d;观察两组小鼠原位肿瘤微血管生成情况及肺部肿瘤转移情况.结果经甲醇诱导酵母转化子表达rhES,并用肝素亲和层析的方法获得纯化的rhES;治疗结束后用免疫组化方法观察两组小鼠原位肿瘤微血管密度发现rhES治疗组肿瘤微血管密度明显小于PBS对照组(P＜0.01);观察两组小鼠肺部发现rhES治疗组小鼠肺部未见有明显肿瘤转移病灶,而PBS对照组小鼠肺部可见大量散在肿瘤转移病灶;两组小鼠肺湿重比较具有显著性差异(P＜0.01).结论rhES具有良好的生物学活性,显著抑制了小鼠肺腺癌LA795肿瘤血管生成,并能有效抑制肿瘤的肺部转移.
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重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795的抑制作用
目的观察重组人内皮抑素(rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用.方法对ThES高效表达克隆pCX的表达产物进行纯化,得到ThES.将LA795肺腺癌细胞接种于T739小鼠背部皮下,随机分成2组,接种后第10天起分别给予rhES 20 mg/kg@b.w.或等体积PBS缓冲液皮下注射,1次/d,共14 d.观察2组肿瘤生长情况、肺湿重、肺表面转移结节数、动物生存时间,分别进行t检验.结果治疗前后rhES组肿瘤体积分别为(650±201)mm3、(1 642±211)mm3;而PBS组肿瘤体积由治疗前的(623±248)mm3增至(9 194±952)mm3.rhES组肺湿重、肺表面转移结节数明显少于PBS组,动物生存时间明显延长(P<0.01).结论rhES可明显抑制LA795所致的小鼠实验性肿瘤的生长与转移,延长动物的生存时间.
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小剂量环磷酰胺治愈荷膀胱癌小鼠过程中外周血血小板计数的动态变化及意义
目的:建立环磷酰胺(CTX)治愈荷膀胱癌T739小鼠的动物模型,观察外周血象特别是血小板计数在化疗治愈肿瘤中的动态变化及其意义.方法:给正常T739小鼠皮下接种小鼠可移植性膀胱移行细胞癌组织,建立荷膀胱癌的小鼠模型.接种后第7天,荷瘤小鼠腹腔内分别注入15、40、100 mg/kg的CTX,等量生理盐水对照,确定CTX治愈肿瘤的量效关系.然后再取12只荷瘤小鼠,随机分成2组,15 mg/ks CTX单次腹腔内注射,等量生理盐水对照,分别在用药后6 h、用药后第2、4、9、14天内眦静脉取血,进行血常规检测,分析荷瘤小鼠外周血象的动态变化.结果:15～100 mg/kg CTX治疗后2周内,荷瘤小鼠肿瘤生长受抑制或肿瘤结节缩小的速率与所用CTX的剂量呈正相关;CTX治疗后2月,荷瘤小鼠的存活率与所用CTX的剂量呈负相关.15 mg/kg CTX单次腹腔内注射在治愈多数荷瘤小鼠的同时对外周血象无明显抑制作用.用药后6 h治疗组荷瘤鼠外周血血小板计数为(1483.4±184.4)×109/L,明显高于对照组小鼠(1086.6±81.0)×109/L,两组数据比较具有统计学意义(P<0.01);用药后第2、4、9、14天治疗组荷瘤鼠外周血血小板计数与对照组小鼠比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:15 mg/kg CTX可治愈多数荷膀胱癌T739小鼠.单剂量CTX治疗后6 h荷瘤小鼠外周血血小板计数的一过性增高可能与其抗肿瘤作用有关.
