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重组SRH融合蛋白工程菌发酵的工艺研究
目的 通过对影响表达SRH融合蛋白工程菌发酵的主要因素的研究,建立适宜SRH融合蛋白工程菌的发酵工艺.方法 通过对发酵过程中的pH、溶氧调控、诱导温度、诱导时机及诱导时间进行优化建立SRH蛋白的发酵工艺,利用SDS-PAGE电泳分析表达情况.进一步利用离子交换和凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,并对纯化后目的蛋白的溶栓活性和抗凝活性进行检测.结果 优化后发酵条件为:发酵pH为7.0、溶氧为45％、菌体浓度达到OD600=8时开始诱导,诱导温度为41℃,诱导时间为4.5h.该发酵条件下得菌量为25g/L.SRH蛋白表达量为45％,并且90％以上为可溶性表达,纯化后蛋白纯度达95％以上,纯品SRH蛋白溶栓活性为1.80×104AU/mg,抗凝活性为100AU/mg.结论 建立了SRH融合蛋白工程菌稳定的发酵工艺,该条件下SRH工程菌发酵蛋白表达量较高,多为可溶性表达,且杂蛋白较少,发酵产物具有生物学活性.
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单克隆抗体亲和层析一步纯化重组人生长激素
单克隆抗体亲和层析技术可用来从体液、组织抽提液、细胞培养液中,特别是从基因工程菌体破碎液等复杂组成物中分离出微量蛋白质和多肽.由于其特异性高,操作简便而迅速,在高价值蛋白质和治疗用多肽的下游处理过程中,作为一种良好的分离纯化工具,有较广泛的适用性.本文运用该技术从人生长激素(hGH)基因工程菌发酵破碎液中一步分离制备高纯度并具有生物活性的重组hGH.
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重组SRH融合蛋白工程菌发酵工艺分析
目的:对SRH融合蛋白工程菌发酵表达的影响因素进行研究和分析,并建立适宜的SRH融合蛋白工程菌发酵工艺.方法:优化SRH发酵过程中的诱导时机、诱导温度、诱导时间、溶氧调控和pH值,建立SRH融合蛋白工程菌发酵工艺,采用SDS-PAGE电泳对其表达情况进行分析;纯化目的蛋白,方法为凝胶过滤层析和离子交换,检测纯化后目的蛋白的抗凝活性和溶栓活性.结果:优化后发酵条件如下:溶氧为45%,发酵pH为7.0,菌体浓度为OD600=8时开始诱导,诱导时间为4.5h,诱导温度为41℃.在此发酵条件下,细菌获得量为25g/L,SRH蛋白的表达量为45%,可溶性表达为90%;目的蛋白经过纯化后,纯度超过95%,100AU/mg和1.80×104AU/mg分别为SRH的抗凝活性和蛋白溶栓活性.结论:建立了SRH融合蛋白工程菌发酵工艺,蛋白表达量在该发酵条件下具有较高值,发酵蛋白中含有少量的杂蛋白,大部分为可溶性表达,发酵产物具有生物学活性.
