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反义血管内皮生长因子原位表达抑制白血病细胞系K562在裸鼠体内生长并诱导其凋亡
目的 观察反义血管内皮生长因子(anti-VEGF)原位表达对白血病细胞系K562在裸鼠体内生长的影响.方法 选用白血病细胞系K562裸鼠体内接种成瘤后,肿瘤内注射重组反义VEGF真核表达质粒及空载体和PBS,检测反义VEGF体内转染情况及其对肿瘤生长的影响;免疫组化法比较实验组和对照组移植瘤微血管密度(MVD)及白血病细胞的凋亡情况.结果 注射反义VEGF表达质粒能抑制肿瘤的生长,使肿瘤的MVD显著降低(25.6±5.77 VS 41±3.8,P＜0.05),并且使肿瘤细胞凋亡增加.结论 肿瘤内注射反义VEGF重组表达质粒在体内能有效转染肿瘤及其周围组织,反义VEGF体内的表达能抑制白血病细胞肿瘤的生长,降低肿瘤内MVD,促进白血病细胞的凋亡.反义VEGF基因治疗策略提供了一种新的白血病辅助治疗方案.
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腺病毒介导反义VEGF降低肿瘤诱导免疫抑制及增强IL-2的抗肿瘤效果
目的:本研究旨在探讨腺病毒介导的反义VEGF降低肿瘤诱导的免疫抑制及增强IL-2的抗肿瘤效果.方法:用反义VEGF修饰及反义VEGF与IL-2基因共同修饰MM45T.Li小鼠肝癌细胞,然后观察修饰后的肿瘤细胞的致瘤性;并在体内观察反义VEGF与IL-2基因诱导肝癌模型小鼠肿瘤细胞的凋亡,以及肿瘤组织中CD4+,CD8+细胞浸润情况.结果:反义VEGF降低了肝癌细胞MM45T.Li的致瘤性;增加了肿瘤组织周围CD4+,CD8+细胞浸润,改善了模型小鼠的免疫抑制状态;提高了IL-2抗肿瘤效果.结论:反义VEGF不仅可抑制新生血管的生成,而且可降低肿瘤诱导的免疫抑制,从而提高免疫系统对肿瘤细胞的识别,与IL-2免疫基因治疗相联合可明显提高对肿瘤的杀伤效果.
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反义VEGF基因转染对HEP-2细胞生物学行为的影响
目的观察反义VEGF基因转染对HEP-2细胞生物学行为的影响.方法克隆人VEGF基因,将VEGF-cDNA反向克隆到真核表达载体pcDNA3,构建反义VEGF表达载体pcDNA3-VEGF(-);利用阳离子脂质体载体,稳定转染人喉癌Hep-2细胞,并通过流式细胞仪检测,观察转染细胞细胞周期的改变,在透射电镜下观察转染细胞超微结构的改变;将转染细胞注入裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况.结果成功克隆了人VEGF基因,并构建了携带反义VEGF基因的真核表达载体pcDNA3-VEGF(-);将其稳定转染人喉癌Hep-2细胞,获得了稳定表达反义VEGF的细胞系,与正常Hep-2细胞相比,该细胞系细胞周期及超微结构均无明显改变;将转染细胞注入裸鼠皮下,与对照组相比,肿瘤的生长速度明显减缓.结论反义VEGF基因转染可以有效地抑制喉癌的生长.
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腺病毒介导的反义 VEGF与可溶性 VEGF受体联合对实验性 MM45T.Li小鼠肿瘤生长及转移的影响
目的：构建并观察含反义 VEGF、 sflt-1、 sflt-1联合反义 VEGF及 lacZ的重组腺病毒对 MM45T.Li小鼠肿瘤生长及转移的影响。方法：通过 RT-PCR从胚胎小鼠中克隆可溶性 VEGF受体基因 (sflt-1)，并比较 sflt-1与 3′末端缺失可溶性 VEGF受体基因 (3′Δ flt-1) 在 COS-7细胞中的表达效率；将含反义 VEGF的重组腺病毒和含 lacZ报告基因的重组腺病毒分别感染 MM45T.Li细胞株，观察反义 VEGF体外抑制 VEGF分泌的作用；采用 CAM实验模型，观察含目的基因的重组腺病毒对鸡胚血管形成的影响；分别将含不同目的基因的重组腺病毒进行瘤内直接注射，每周体外测量肿块大小， 7周后处死小鼠，观察有无转移，并对肿瘤组织冰冻切片后进行 VEGF、可溶性 VEGF受体（ sflt-1）表达及新生血管形成的免疫组织化学分析；余下的小鼠共观察 13周，记录小鼠死亡时间，计算生存函数。结果：含反义 VEGF的重组腺病毒感染 MM45T.Li细胞后，能明显减少 VEGF的分泌 (P<0.01)；鸡胚注射 Ad sflt 1、 Ad antisense VEGF及 Ad sflt 1/antisense VEGF后，其血管的分布较注射 Ad lacZ组明显减少，甚至造成死胚；经 sflt 1、反义 VEGF治疗的荷瘤小鼠肿瘤生长速度较对照组明显减慢（ P< 0.01），肿瘤体积明显变小（ P< 0.01），肿瘤转移率减少（ P< 0.05）， 13周生存率明显延长（ P< 0.01）；而且反义 VEGF与 sflt 1联合具有正叠加效应。结论：腺病毒介导的反义 VEGF与 sflt-1都能有效地抑制新生血管的形成，反义 VEGF与 sflt-1联合可明显增强抑制效果；反义 VEGF与 sflt 1在抑制新生血管形成的同时也抑制了肿瘤的生长与转移，从而延长了荷瘤小鼠的生存期。
