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miR-449b通过E2F3-p53途径抑制子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B的生长
目的 探讨miR-449b对子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B增殖和凋亡的影响及其作用的分子途径.方法 脂质体lipofectamine 2000包被miR-449b并转染入HEC-1-B细胞,实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miR-449b的表达水平,CCK-8试验检测转染前后细胞活性,流式细胞仪来检测转染前后细胞凋亡情况.细胞克隆形成实验观察转染前后细胞克隆形成能力.Western blot方法检查转染前后细胞内E2F3蛋白和p53的表达情况.结果 转染后实验组miR-449b表达量较NC组增加,细胞增殖能力和克隆能力减弱,而细胞凋亡增加(P＜0.05).miR-449b使E2F3表达下调,p53表达上调(P＜0.05).结论 miR-449b通过E2F3-p53途径抑制HEC-1-B细胞增殖并促进凋亡,可能作为治疗子宫内膜腺癌的新分子靶标.
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莪术油注射液诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡机制研究
目的:研究莪术油注射液对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞体外增殖及相关蛋白表达情况的影响.方法:将体外培养的HEC-1-B细胞随机分5组,对照组、莪术油Ⅰ组、莪术油Ⅱ组、莪术油Ⅲ组、莪术油Ⅳ组.分别给与不同浓度的莪术油注射液培养48 h、72 h.采用MTT法检测HEC-1-B生长抑制率、Hoechest33258荧光染色观察HEC-1-B细胞核形态的变化、Western blot法检测相关蛋白的表达水平.结果:不同浓度莪术油注射液均对HEC-1-B细胞增殖具有抑制作用,同时诱导HEC-1-B细胞凋亡,上调Caspase-3蛋白的表达,下调Survivin蛋白的表达,其强度随着药物作用浓度及时间的增加而增强,呈时间-剂量依赖性,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:不同浓度莪术油注射液在一定浓度范围内可抑制HEC-1-B细胞生长,且诱导其凋亡,其机制可能与下调子宫内膜癌HEC-1-B细胞Survivin蛋白的表达,上调Caspase-3蛋白的表达有关.
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黄花倒水莲雌激素活性成分筛选
目的:研究黄花倒水莲不同提取成分的雌激素活性.方法:体外培养子宫内膜癌细胞株Hec-1-B,种于96孔板,24h后给予黄花倒水莲总黄酮、总皂苷、总多糖提取物,并以补佳乐为阳性药,加药24h后,Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)分别检测不同成分对细胞生长的影响;另种96孔板,给予不同成分提取物,24h后,提取上清液,用人(Human)雌激素受体(ER) ELISA检测试剂盒,测得ER受体的含量,反应雌激素活性情况.结果:CCK-8结果显示总黄酮和总皂苷对细胞具有毒性,在0.5g·L-1、1 g·L-1、2 g·L-1时有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01),有明显的量效关系;总多糖和阳性药补佳乐对细胞没有毒性,能够促进细胞增殖.ELISA试剂盒显示,总多糖组和补佳乐组ER含量相同且低于正常组.结论:黄花倒水莲不同部位中总多糖具有雌激素活性.
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真核表达质粒EX-Y2069-M29的构建及LRP16基因在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达
目的 构建LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29,检测LRP16基因在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达.方法 体外培养人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将LRP16真核表达载体EX-Y2069-M29和EX-NEG-M29空质粒转染细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法分析LRP16基因的表达情况.结果 经LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29转染的HEC-1-B细胞中检测到LRP16基因的表达.结论 构建的LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29转染HEC-1-B细胞后,可在HEC-1-B细胞中稳定表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础.
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miR-375在子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的生物学功能
目的:探讨miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及对HEC-1-B细胞增殖、凋亡的影响.方法:miRNA芯片分析Ⅱ型子宫内膜癌miRNA表达谱.利用lipofectamine2000转染HEC-1-B细胞.实时荧光定量PCR检测转染后miR-375的表达.CCK-8检测转染后细胞增殖能力的改变.流式细胞仪检测细胞转染效率及转染后细胞凋亡情况.结果:miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌组织中低表达.转染效率达73.43％.转染后实验组miR-375表达量较NC组和对照组明显增加(P＜0.05).实验组较NC组生长明显受抑(P＜0.05).实验组较NC组、对照组凋亡明显增加(P＜0.05).结论:初步证明miR-375抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖并促进凋亡,可能成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的靶点.
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LRP16基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对细胞增殖的作用
目的：研究LRP16在子宫内膜癌组织中的表达变化及其对子宫内膜癌 HEC-1-B细胞增殖的影响。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测26例正常子宫内膜组织及10例子宫内膜癌组织中LRP16 mRNA的表达；LRP16转染细胞， RT-PCR证实转染的成功性，WST-1法观察细胞增殖的变化。结果子宫内膜癌组织中LRP16 mRNA的阳性表达率及表达水平（分别为83．33％、0．82±0．21）明显高于正常子宫内膜组织（分别为30．00％、0．47±0．18），二者比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。RT-PCR检测结果显示转染后细胞LRP16 mRNA表达明显增加。转染组 HEC-1-B细胞在体外能继续增殖，但增殖能力并没有增强。结论： LRP16的异常表达可能与子宫内膜癌的发生、发展密切相关，LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。
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白血病相关基因LRP16真核表达质粒的构建及其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达
目的:构建白血病相关基因LRP16真核表达质粒,并检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达.方法:从人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至HEC-1-B细胞,采用Western blot法检测LRP16蛋白的表达.结果:酶切和测序结果证明LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29的DNA序列完全正确,将其转染HEC-1-B细胞后,LRP16蛋白表达明显增加.结论:LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29构建成功,并能在HEC-1-B细胞中表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础.
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真核表达质粒EX-Y2069-M29的构建与LRP16在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达及作用
目的 构建真核表达质粒EX-Y2069-M29,检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达,并观察LRP16对细胞增殖的影响.方法 从HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至HEC-1-B细胞,采用Western blot法检测LRP16蛋白的表达,用WST-1法检测细胞增殖情况.结果酶切和测序结果证明真核表达质粒EX-Y2069-M29的DNA序列完全正确,将其转染HEC-1-B细胞后,LRP16蛋白表达明显增加;转染后HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力明显下降.结论 LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29构建成功,并能在HEC-1-B细胞中表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础;转染LRP16后并没有促进HEC-1-B细胞体外增殖,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值.
