微粒体甘油三酯转运蛋白MTP研究进展

MTP存在于细胞微粒体、内质网腔内,在内质网内含量高,占总蛋白的0.5%～1.0%.用层析技术获得纯的MTP在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳上表现为两种异构体,其分子质量是58000和88000;另外用沉降平衡技术测得的分子质量是150 000,说明MTP有两种异源二聚体.氨基酸测序和免疫技术分析证明低的是一个亚单位,称为蛋白二硫化合物异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)它的二硫化合物异构酶活性能使新合成蛋白质的一对半胱胺酸残基形成二硫键.另外它也是四聚体酶的成分,四聚体羟化酶有α和β两个亚基,β则为PDI.在体外PDI可以单独存在,其含量超过MTP,也可以自我形成二聚体和四聚体.MTP的大亚基不被去污剂所溶解,其可能与PDI协同翻译有关或者是PDI的分子伴侣(chaperone).PDI对于MTP是很重要的,这表现在当单独将MTP表达在昆虫Sf9,MTP无活性,而与PDI一起表达时MTP才有活性,说明它是MTP的组成和功能基础.PDI由491个氨基酸组成,当它成为MTP成分时活性仅为游离时的1/10,当其解离后活性增加,其活性中心在35～40和379～384两段氨基酸残基序列处.人的MTP大亚基具有高度的保守性、但同源性较低;其少数几个区域与卵黄磷脂蛋白序列具有同源性,可推测它是卵黄原蛋白的家族[1].

乙酰肝素酶大亚基在毕赤酵母中的表达

目的 构建乙酰肝素酶(HPA)大亚基片段真核表达质粒,并在毕赤酵母中表达重组蛋白.方法 根据GenBank中登录的HPA大亚基基因序列设计引物,PCR方法扩增肝素酶基因,构建毕赤酵母真核表达质粒pPICZαA-HPA.电击穿孔法转化感受态毕赤酵母SDM1168,斑点免疫印迹法筛选重组菌株,PCR法鉴定阳性克隆.甲醇诱导表达重组蛋白,Western blot鉴定表达产物.结果 构建的重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;斑点免疫印迹法筛选出的9个单菌落经PCR扩增,均可见1 161 bp的目的基因条带;表达产物经Western blot分析,具有良好的反应原性,表达量约为μg/L.结论 已成功构建了HPA大亚基片段真核表达质粒pPICZαA-HPA,并在毕赤酵母SDM1168中分泌表达了HPA大亚基.

039 编码日本血吸虫钙蛋白酶80 kDa大亚基的cDNA的鉴定和表达

肺炎支原体动物感染模型的建立及病原感染控制现状的研究

肺炎支原体(Mp)是儿童和青少年呼吸道感染的常见病原体,大环内酯类抗生素是治疗Mp感染的首选药物.以红霉素为代表的大环内酯类抗生素作用机制是通过抑制蛋白质的合成而发挥抗菌作用,即大环内酯类抗生素结合于核糖体50S亚基的转肽酶中心与肽输出通道狭窄之间的部分,通过机械性的阻塞通道而抑制肽的延伸,从而阻碍蛋白质的合成[1-3].其在大亚基上(50S亚基)的结合位点是23SrRNA结构域V中心环的保守碱基A2058-A2062和U2609[4-5].

酸性核糖体磷酸化蛋白P0的研究进展

原核生物和真核生物的核糖体大亚基上都存在着一类与蛋白质翻译密切相关的酸性核糖体磷酸化蛋白.在真核生物它们是酸性核糖体磷酸化蛋白P0,P1,P2(acidic ribosomal phosphoproteins P0,P1 and P2),而在原核生物如Escheriehia coli体内,它们分别为L10和L7,L12蛋白,其中与P0蛋白相对应的蛋白为L10,与P1、P2蛋白相对应的蛋白为L7/L12.

GFP共表达检测重组型Caspase-3对HeLa细胞凋亡的诱导作用

[贾林涛,于翠娟,许彦鸣,赵晶,高下,张淼丽,王成济,杨安钢. 细胞与分子免疫学杂志,2001;17(3):218-221]目的探讨由野生型人caspase-3大小亚基颠倒构建的重组型caspase-3的促细胞凋亡活性. 方法用RT-PCR法获得人caspase-3基因. 通过重组PCR进行改造,构建小亚基位于大亚基之前的两种重组型caspase-3基因,它们所对应的蛋白质的N端,分别带有或没有其自身识别的四肽序列. 将上述基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pIRES2-EGFP中,转染人HeLa细胞,在荧光显微镜和电镜下观察转染细胞的形态和结构. 结果成功地获得了野生型caspase-3基因及两种重组型caspase-3基因. 构建了重组型caspase-3基因的表达载体. 转染HeLa细胞后,重组型caspase-3基因在细胞中得到表达,随后引起细胞荧光强度下降,生长状况变差甚至死亡. 电镜观察显示,许多细胞呈现凋亡的典型特征. 结论重组型caspase-3可促进HeLa细胞的调亡.(井晓梅)