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新疆细粒棘球绦虫EgAgB8/3蛋白的生物信息学分析及意义
目的 分析新疆细粒棘球蚴EgAgB8/3蛋白氨基酸序列,了解该蛋白特性,预测其抗原表位,为进一步研究和选择包虫病免疫学诊断与防治的佳候选抗原提供理论依据.方法 利用生物信息学方法推测EgAgB8/3蛋白氨基酸序列及理化性质,用不同的生物信息学软件分析EgAgB8/3蛋白的特性及二级结构,并结合多参数预测其抗原表位.结果 EgAgB8/3抗原是由75个氨基酸残基组成的多肽,相对分子质量为8.58×103,等电点为8.5;蛋白特性分析显示EgAgB8/3蛋白α螺旋、β折叠、β转角和无规卷曲等二级结构特点,有3个β转角较好区域可作为表位所在参考区段;3种软件多参数综合分析预测,EgAgB8/3蛋白抗原表位集中在1～7(FVVVAHA)、6～19(HADDDDDEVTKTKK)、32～38(FQSDPLG)区段.结论 运用生物信息学分析方法预测到EgAgB8/3抗原3个B细胞的优势表位,对进一步研究EgAgB8/3抗原性和研发更有价值的包虫病免疫诊断与防治靶标具有重要意义.
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pTWIN1-EgAgB8/3自剪切融合蛋白原核表达载体的构建及表达
目的 表达获得较纯的细粒棘球绦虫AgB8/3重组抗原(rEgAgB8/3).方法 根据GeneBank登陆号(AF362442)下载目的 基因核酸序列,利用DNAman软件设计引物,对EgAgB8/3编码分泌型多肽片段的核酸序列进行PCR扩增,测序鉴定其正确性后定向连入原核表达质粒pTWIN1上,并转化至大肠杆菌ER2566,IPTG诱导表达CBD-intein1-EgAgB8/3融合蛋白后进行纯化,用SDS-PAGE电泳和western blot分析鉴定融合蛋白与目的 蛋白rEgAgB8/3的表达量和纯度.结果 成功克隆获得EgAgB8/3基因目的 片段和具有蛋白自剪切功能的重组表达载体pTWIN1-EgAgB8/3,并鉴定其表达的融合蛋白主要以可溶形式存在;构建的重组载体中融合标签的几丁质结合域(CBD)和内含肽(intein1)分别使亲和层析纯化和融合标签自剪切一步完成.结论 成功的构建重组表达载体pTWIN1-EgAgB8/3,获得高表达融合蛋白CBD-intein1-EgAgB8/3,并经简单后续处理即可获得含极少任何额外氨基酸的可溶性目的 蛋白rEgAgB8/3,尽可能保证了其原有的结构和活性,为抗rEgAgB8/3特异性单克隆抗体的快速制备奠定了基础.
