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肺腺癌A549绿色荧光裸鼠模型中肿瘤血管内皮细胞来源初探
目的 建立绿色荧光裸小鼠皮下接种肺腺癌A 549模型,研究肺腺癌肿瘤血管生成过程中血管内皮细胞的来源.方法 建立肺腺癌A 549皮下接种GFP裸小鼠模型,应用免疫荧光染色法进行CD 31染色,标记肿瘤血管;采用荧光显微镜观察并拍摄肿瘤组织冰冻切片;免疫组化检测肿瘤组织血管中内皮细胞内GFP表达.结果 免疫荧光实验结果显示:GFP蛋白和CD 31蛋白可共表达于部分间质血管;部分血管表达CD 31蛋白而不表达GFP蛋白.免疫组化实验结果:肿瘤组织中部分间质细胞的细胞质和内皮细胞的细胞质表达GFP蛋白.结论 组成肿瘤新生血管的内皮细胞部分来源于裸鼠体内,部分来源于肿瘤细胞.
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肺腺癌A549细胞培养上清液对人单核细胞衍生树突状细胞的影响
目的:观察肺腺癌A549细胞培养上清液(TSN)对人单核细胞衍生树突状细胞(MoDC)的表型、增殖和抗肿瘤A549免疫应答的影响.方法:制备人肺腺癌A549细胞的TSN、灭活TSN和冻融抗原;人MoDC培养按照不同培养条件组合分为7组,分别于培养全程或晚期(第7 d)加入TSN或第4 d加入冻融抗原冲击致敏,制备MoDC瘤苗,第9 d收获细胞.检测各组MoDC表型、MoDC凋亡率、体外混合淋巴细胞反应(MLR)、MoDC诱导的细胞毒性T细胞(CTL)抑瘤活性、培养上清液中IL-12含量.结果:培养全程加TSN的MoDC,相对特异性表型CD80、CD83和人类白细胞抗原(HLA-DR)明显下调,凋亡率明显升高,同时,激活T细胞增殖能力、诱导CTL抑瘤活性及分泌IL-12的量均显著低于正常培养组;培养晚期加TSN的MoDC及培养全程加入灭活TSN的MoDC,均无上述影响;脱离TSN影响、体外正常制备的MoDC瘤苗,表型明显上调、各项免疫指标明显升高,诱导出了高效的抗A549免疫应答.结论:TSN能干扰MoDC成熟过程,下调其表型表达,诱导其凋亡发生,抑制其介导的抗肿瘤免疫应答;而脱离TSN影响、体外正常制备的MoDC瘤苗能够诱导出高效的抗瘤免疫应答.
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人野生型survivin-1基因重组载体的构建及其在A549中的表达
目的 克隆细胞凋亡抑制蛋白Survivin异构体之一Survivin-1(SVV-1)基因的编码序列,构建含SVV-1基因的真核细胞表达载体并在肺腺癌细胞系A549中高表达,为进一步研究该基因在肺腺癌发病中的作用奠定基础.方法 根据已发表的SVV-1基因的核苷酸序列自行设计一对分别含有BamHI和Xho l双酶切位点的survivin-1基因上下游引物,以A549细胞系抽提的RNA为模板进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物用Bam HI和XhoI双酶酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.0中,用限制性内切酶酶切重组质粒pcDNA3 0-SVV-1和DNA序列测定进行鉴定.用脂质体法将pcDNA3.0-SVV-1导入肺腺癌细胞系A549中,嘌呤霉素选择培养,经免疫组化法和western blot鉴定其表达.结果 RT-PCR扩增出长448 bp的特异性片段,经克隆至pcDNA3.0后酶切鉴定证实,并测序表明序列与Gen-Bank报道完全一致.pcDNA3.0-SVV-1在A549细胞中有稳定表达.结论 成功克隆了SVV-1的编码序列,构建了其真核细胞表达载体pcDNA3.0-SVV-1,有助于对SVV-1基因在腺癌发生中的致瘤机制做进一步研究.
关键词： Survivin-1基因 基因克隆 真核表达载体 肺腺癌A549 -
二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响
目的:观察二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响.方法:采用形态学及MTT法观察二母颗粒组(10g/kg)5％、10％、20％含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用;通过流式细胞法观察药物对细胞凋亡的影响.结果:形态学观察表明二母颗粒含药血清使A549及SMMC-7721细胞株发生形态改变;MTT结果显示二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖有抑制作用,且随含药血清浓度的增高以及作用时间的延长,抑制作用亦有所加强.其中20％含药血清作用于A549及SMMC-7721细胞株48h,10％含药血清作用于A54948h,其OD值与对照组比较均有统计学差异;流式细胞技术检测结果表明20％含药血清作用于A549细胞株24h及48h,10％含药血清作用于A54948h,与同时间段阴性对照组比较凋亡率明显升高;20％、10％含药血清作用于SMMC-7721细胞株24h及48h,对肿瘤细胞的凋亡率也有明显升高的作用.结论:二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株的增殖有抑制作用,其作用机制与其诱导细胞凋亡有密切的关系.
关键词： 二母颗粒 肺腺癌A549 肝癌SMMC-7721 凋亡
