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乳腺上皮细胞特异性敲除Scrib基因杂合子小鼠的制作与鉴定
目的 利用Cre-LoxP重组酶系统构建乳腺上皮细胞特异性敲除Scrib基因杂合子小鼠,并进行鉴定,为进一步在动物整体水平研究Scrib基因在乳腺癌中的作用提供研究平台.方法 将Scrib条件敲除杂合子小鼠(Scrib+/ft小鼠)进行繁殖并鉴定,然后将鉴定结果为阳性的子代Scrib+/ft小鼠与乳腺上皮细胞特异性表达Cre重组酶的MMTV-Cre纯合子小鼠进行杂交,鉴定其子代小鼠的基因型.结果 成功繁育Scrib条件敲除小鼠和MMTV-Cre小鼠,并通过鉴定得到Scfib+/ft小鼠,与MMTV-Cre小鼠杂交并繁殖,获得基因型为Scrib+/ft；MMTV-Cre+/-小鼠5只.结论 本研究利用Cre-LoxP重组酶系统成功构建了乳腺上皮细胞特异性敲除Scrib基因杂合子小鼠,为进一步研究极性蛋白Scrib表达下调在乳腺癌发生中的作用提供了良好的动物模型.
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CCN1基因肺特异性条件敲除小鼠模型的构建和鉴定
目的:构建Cre重组酶系统调控的肺特异性的富半胱氨酸血管生成诱导因子61(CYR61,又称CCN1)基因条件敲除小鼠,为肺组织内CCN1在炎症中扮演的角色和作用机制的体内实验研究提供更特异的动物模型.方法:将引进的CCN1flox/flox转基因小鼠和肺上皮细胞特异性表达Cre重组酶工具鼠分别进行繁殖和鉴定,然后将2种小鼠进行杂交并对其子代小鼠的基因型进行鉴定,其子代基因型为Cre+/-CCN1flox/flox的小鼠为本研究所构建的肺上皮细胞特异性CCN1基因条件敲除小鼠.结果:Cre+/-CCN1flox/flox的小鼠被成功繁殖并鉴定.使用他莫昔芬腹腔注射处理Cre+/-CCN1flox/flox实验组及Cre-/-CCN1flox/flox对照组,分别使用RT-PCR、免疫荧光、免疫组织化学、Western blot检测肺组织中CCN1的mRNA和蛋白表达,与对照组比可见实验组肺组织中CCN1的mRNA和蛋白表达均明显下降.结论:本研究基于Cre-LoxP技术成功构建了肺上皮细胞特异性CCN1基因条件敲除小鼠,并能稳定传代,可为进一步研究CCN1在肺组织内炎症中调控作用和机制奠定了动物模型的基础.
关键词： CCN1 Cre-LoxP CCN1flox/flox 肺特异性表达 小鼠 -
大鼠Smad1基因重组腺病毒的构建
目的 利用Cre-loxP特异性位点基因重组技术构建大鼠Smadl的重组腺病毒.方法 巢式PCR得到大鼠Smadl全部开放阅读框架序列,克隆到质粒pCR-Blunt II-TOPO中,然后将目的 基因片段连接到中间载体质粒pDNR-CMV,测序后在Cre重组酶作用下,将Smad1 cDNA转移到腺病毒载体pLP-Adeno-X-CMV.在HEK 293细胞中包装和扩增重组腺病毒,并检测Smad1基因重组腺病毒在大鼠肝脏星状细胞系HSC-T6中的表达和功能.结果 PCR法和限制性内切酶Xhoi I消化法均证实Smad1重组腺病毒的成功构建,RT-PCR和Western Blot检测证实该重组腺病毒显著性增强了HSC-T6细胞中Smad1的mRNA、蛋白表达及其磷酸化水平.结论 Cre-loxP特异性住点基因重组技术是一种快速、高效构建基因重组腺病毒的方法 ,大鼠Smad1基因重组腺病毒的成功构建为与Smad1有关的细胞信号调控以及基因治疗提供了良好的工具.
