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慢性肾脏病血管钙化大鼠血清炎症因子抗体芯片检测及分析
目的 应用抗体芯片技术检测慢性肾脏病(chronic renal disease,CKD)血管钙化大鼠模型血清中的炎症细胞因子水平,并探讨炎症与血管钙化之间的关系.方法 30只SD雄性大鼠分成对照组和模型组,每组15只.模型组大鼠联合腺嘌呤灌胃和阿霉素尾静脉注射建立大鼠慢性肾脏病血管钙化模型;对照组大鼠给予相应的生理盐水处理.给药28 d后取材检测肾功能、电解质等生化指标,天狼猩红染色法检测肾纤维化病变,HE染色检测血管病理改变,von Kossa染色法检测血管钙化程度,免疫组织化学染色法检测平滑肌肌动蛋白 α(α-SMA)及Runt相关转录因子2(Runx2)表达.细胞因子抗体芯片检测两组大鼠血清中27种细胞因子水平的变化.结果模型组大鼠血肌酐、尿素氮及钙磷水平升高;天狼猩红染色显示模型组大鼠肾有明显的纤维化病变;HE染色显示主动脉中膜有弹性纤维断裂;von Kossa染色显示模型组大鼠主动脉中膜层有大量黑色颗粒沉积;免疫组织化学染色显示模型组较对照组 α-SMA表达减少而Runx2表达增多.抗体芯片结果显示模型组CINC、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-6、MCP-1、ICAM-1、TIMP-1、L-selectin、IL-2及IL-10较对照组均有不同程度的升高,而IL-4、IL-13、fractaikine、IL-1β、TNF-α 较对照组降低.结论 慢性肾脏病血管钙化大鼠发生了明显的炎症反应失衡,其中致炎因子占主导作用.
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细胞因子和生长因子在人脐带Wharton胶间质干细胞的表达谱
目的 观察细胞因子和生长因子在人脐带Wharton胶间质干细胞(WMSCs)的表达,了解其生物学特性,为其临床应用提供实验依据. 方法 取人足月妊娠新生儿脐带,分离MSCs,应用成纤维细胞集落形成实验验证其干细胞特性,流式细胞术鉴定其表面分子特性,蛋白芯片方法观察细胞因子和生长因子的表达. 结果 所检测的79种因子除白介素(IL)-13表达痕量外,其他均表达于WMSCs,表达从多到少(OD值＞0.800)依次为IL-8、生长相关癌基因(GRO)、IL-6、IL-1β、IL-1α和GRO-α;它表达6种免疫抑制功能的因子和肿瘤生长抑制因子,这对减少MSCs用于异体移植时的免疫排斥及瘤变的可能性起一定作用,而其表达的金属蛋白酶抑制因子TIMP-1、TIMP-2将对其应用于体内移植时起到保护自身的作用;多种神经生长因子(脑源性神经生长因子、神经生长素-3、神经生长素-4、胶质细胞源性神经生长因子)的表达表明WMSCs易于向神经细胞诱导分化. 结论 人脐带WMSCs易于获得,表达的细胞因子有利于其应用于异体移植,减少免疫排斥及恶变,并保护其自身在体内分化生长,是一个很有前景的新型种子细胞,可应用于再生医学及构建组织工程组织或器官.
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细胞因子抗体芯片筛选脓毒症患者血清蛋白标记物
目的:应用细胞因子抗体芯片(CAC)分析脓毒症患者血清中炎性细胞因子表达的变化.方法:采用CAC技术平台,测定9例脓毒症患者(脓毒症组)和4例正常健康人(对照组)血清中79种细胞因子.以两组样本中每组至少有4个样品的杂交信号值超过400为有表达的蛋白,筛选出有表达的蛋白38个.应用芯片差异显著性分析(SAM)软件对38个有表达的蛋白进行差异表达分析.结果:筛选到胰岛素样生长因子结合蛋白-1( IGFBP-1)、肝细胞生长因子(HGF)、骨桥蛋白(Osteopotin)、胰岛素样生长因子结合蛋白-4(IGFBP-4)、干扰素诱导蛋白-10( IP-10)和B淋巴细胞趋化因子(BLC)等6个在脓毒症患者血清中高表达的细胞因子,以及血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、脑源性神经营养因子(BDNF)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP-11β)、白细胞介素-8( IL-8)、表皮生长因子(EGF)和白介素-1β(IL-1β)等6个在脓毒症患者血清中低表达的细胞因子.聚类分析表明,上述这12个差异表达的细胞因子能够区分脓毒症和正常健康对照.结论:CAC是一种高效、快速的蛋白质组学技术,利用CAC从血清中筛选脓毒症相关蛋白分子标记物是可行的.
