首页 > 文献资料
-
狨猴B2m基因沉默位点在细胞水平的验证
目的 在细胞水平筛选狨猴B2m基因的有效沉默靶点,并进行验证.方法 查询人源B2m验证过的有效siRNA靶位点序列,与狨猴B2m基因序列进行同源性比较,选择匹配靶点合成shRNA序列.将体外合成的2条干扰序列分别与慢病毒载体 FUGW-TDT连接,构建FUGW-TDT-shb2m干扰表达质粒,在聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导下转染293T细胞,转染后48h,用实时荧光定量法检测转染细胞中B2m基因mRNA的水平.结果 筛选出2个与狨猴完全同源的B2m沉默靶位点,分别位于B2m mRNA 的290~310 bp,665~685 bp;B2m两个靶点在转录水平的沉默效率分别为(46.54±7.91)%(P < 0.05)和(83.22±4.37)%(P < 0.0001),差异有显著性.结论 成功构建成FUGW-TDT-shb2m重组质粒;在细胞水平筛选得到2个有效的B2m基因沉默靶点;为后续有关介导狨猴B2m基因沉默的研究奠定了基础.
-
兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定
目的 狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG.方法 HiTrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法( ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定.结果 狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95% 、97% ;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64. ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显.结论 制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源.
-
狨猴人工辅助生殖技术及基因修饰模型研究进展
普通绵耳狨猴是体型较小的非人灵长类实验动物,具有饲养成本低,繁殖效率高,性成熟时间短等优势,非常适合开展辅助生殖技术及基因修饰模型研究.狨猴的人工辅助生殖技术(assisted reproduction technology,ART)主要包括:精液采集、超数排卵、卵母细胞采集、体外成熟、体外授精、胚胎培养和移植等.目前各项技术的研究较全面,但仍有细节亟需完善.随着基因编辑技术的兴起,基于人工辅助生殖技术的狨猴基因修饰研究逐渐成为热点.2009年日本首次成功开展转基因狨猴研究,截至目前,中国尚无基因修饰狨猴相关报道.本文就近年来狨猴人工辅助生殖技术,以及狨猴基因修饰研究进展进行综述.
-
致普通棉耳狨猴死亡病原的初步研究
普通棉耳狨猴,又称普通狨猴或簇耳狨猴,由于其在种系发生上与人类接近,且具有体小,繁殖率高,易管理等优点,70年代被英国科学家实验动物化,现已广泛用于医学等多领域的研究.某动物中心自80年代从国外引进该实验动物,经过不断的努力,目前已形成我国唯一稳定的狨猴饲养规模群体,为国家的八五、九五科研攻关课题及基础医学研究提供了大量的实验动物.1999年夏季,在其饲养的狨猴群体中暴发传染病流行,临床主要表现为上呼吸道感染症状,并导致大批动物死亡,死亡率达33%.为寻找病原,确定动物死亡原因,我们随机选取4只死亡狨猴进行解剖,对其肺组织进行了病原的分离、培养.经血清学试验,标准诊断血清鉴定,初步认定分离到的病原体是乙型流感病毒,并对其与人的相关性进行了初步探讨.
-
普通狨猴的血清酶学分析
目的探讨实用有效的普通狨猴血清酶学检验方法.方法常规法分离血清,采用2,4二硝基苯腙比色法,24h内测定狨猴血清中异柠檬酸脱氢酶(ICD)活力,IFCC法测定丙氨酸转氨酶(ALT)、草氨酸转氨酶(AST)及γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的活力,平板琼脂糖凝胶电泳测定乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的活力水平,并与国内外相关实验结果进行比较.结果75只普通狨猴的ALT、AST、γ-GT和ICD活力水平与国内外相关实验结果基本相符,不同试剂等实验条件会造成实验结果出现较大差异.结论ALT、AST和ICD是甲型肝炎研究中狨猴肝脏损伤的有效指标.采用动物实验前自身对照值是可靠和科学的血清酶学分析方法.
-
狨猴肝HAAg检测抗HAV-Ig:M的临床研究
1978年在急性期甲型病毒性肝炎(甲肝)患者的粪中发现了甲肝病毒抗原(ⅡAag)[1].随后发展了各种检测甲肝抗体的血清学试验(如OF[2]、IAHA[3]、SPRIA或ELISA的竞争法等[4]).近年来国内报道ELISA检测抗-HA-IgM时,多采用粪提取HAAg[5,6],结果不很理想.本文采用从感染甲肝的狨猴肝脏中提取的HAAg检测抗-HA-IgM,并动态观察了甲肝患者血清抗-HA-IgM的变化,报告如下.
-
狨猴地方性甲状腺肿动物模型的复制
在1907～1908年,Marin用羊、猪、狗、牛复制了饲以低碘饲料所致的动物模型[1].阐明了碘和甲状腺肿的关系,证实碘缺乏可造成甲状腺的胶样肿和增殖.
