首页 > 文献资料
-
人纤维环细胞与骨髓间充质干细胞Transwell共培养研究
目的 探讨人的纤维环(AF)细胞与骨髓间充质千细胞(BMSCs)在Transwell共培养后,对AF细胞的细胞增殖和细胞外基质合成的影响,以及BMSCs是否具有向AF细胞分化的能力.方法 分别对5例年龄在40岁以下脊柱手术患者的纤维环组织和骨髓标本进行分离、培养AF细胞和BMSCS,分别吸取第三代的AF细胞和BMSCs,按1∶1的细胞比例分别植于Transwell共培养系统中,下室植入BMSCs,上室植入AF细胞.并且建立3个细胞培养组,即BMSCs与AF细胞共培养组(实验组),BMSCs单独培养组和AF细胞单独培养组作为对照组.培养3周后,运用倒置相差显微镜观察细胞的形态变化；分别用HE染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色和流式细胞仪对两种细胞鉴定；运用荧光定量PCR法检测各细胞培养组蛋白聚糖Aggrecan、Ⅰ型胶原蛋白mRNA及Sox9的表达变化.结果 两种细胞在分离培养后经过鉴定确定为AF细胞和BMSCs.在倒置相差显微镜观察下,共培养组中AF细胞和BMSCs在细胞增殖数量和速度上均高于各自的单独培养组；共培养组中AF细胞和BMSCs 的蛋白聚糖Aggrecan、Ⅰ型胶原蛋白mRNA及Sox9的表达均较各自的单独培养组高(P＜0.05).结论 通过BMSCs与AF细胞Transwell共培养,BMSCs可以促进AF细胞增值和细胞外基质的合成；同时通过共培养,BMSCs具有向AF细胞分化的可能.
关键词： 纤维环细胞 骨髓间充质干细胞 Transwell共培养 人 -
牙髓干细胞共培养改善1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的神经元凋亡
背景:如何利用牙髓干细胞改善神经损伤对于神经退行性疾病的临床治疗具有重要的意义.目的:探讨牙髓干细胞共培养对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的神经元凋亡的影响.方法:分离培养人牙髓干细胞,进行形态观察和成脂成骨诱导分化能力鉴定;分离中脑神经元细胞,利用Transwell小室进行牙髓干细胞和神经元共培养,然后加入MPP+干预48 h,通过Tunel染色和western blot法检测牙髓干细胞对MPP+诱导的神经元凋亡的影响.结果与结论:①牙髓干细胞形态呈梭形,且能够成功向成脂成骨方向诱导分化;②牙髓干细胞和神经元细胞共培养后,减轻了 MPP+诱导的神经元凋亡;③MPP+处理后降低了 Bcl-2的表达,促进了 Bax 和 cleaved caspase3的表达,而在牙髓干细胞共培养条件下,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显上升,促凋亡蛋白Bax和cleaved caspase3表达明显下降;④结果表明,人牙髓干细胞可以保护或修复体外MPP+诱导的神经元损伤,该保护作用可能是通过人牙髓干细胞的旁分泌作用来实现的.
-
不同共培养模式下间充质干细胞对造血干细胞增殖的作用
背景:虽然进行了大量相关研究,但目前仍缺乏切实可行的体外扩增造血干细胞的方法.间充质干细胞能分泌多种促进造血干细胞增殖并抑制其分化的细胞因子,在维持造血微环境及调控造血干细胞功能中发挥着重要的作用.目的:探讨不同共培养模式下骨髓间充质干细胞在体外对造血干细胞增殖的影响.方法:采用全骨髓贴壁法体外培养 C57BL/6小鼠间充质干细胞至 P3代,采用 miniMACS 磁珠分选仪分选GFP小鼠(C57系)骨髓CD117+细胞(造血干细胞),采用不同共培养模式将2种细胞进行共培养:对照组为造血干细胞单独培养组;实验组为 Transwell 共培养组(上室接种造血干细胞、下室接种间充质干细胞);2D 接触共培养组(24孔板共同接种造血干细胞与间充质干细胞).分别于共培养1,3,5,7 d于倒置相差显微镜、荧光显微镜下观察造血干细胞的形态,并检测造血干细胞的活性细胞数.结果与结论:共培养1-7 d,各组造血干细胞数量均随着培养时间的增加而增加(P < 0.05).各组细胞自3 d开始进入对数生长期,5 d时部分造血干细胞开始出现形态变化.比较第7天造血干细胞活性细胞数,可知与间充质干细胞共培养的实验组及2D接触共培养组均明显高于对照组(P < 0.05):而2D接触共培养组造血干细胞数明显高于非接触培养的实验组(P < 0.05).结果提示:间充质干细胞在体外能够有效促进造血干细胞增殖,接触共培养条件下其促进作用更明显.
-
角膜内皮细胞与脉络膜色素瘤细胞培养后细胞生物行为研究
目的 观察角膜内皮细胞(CECs)与脉络膜黑色素瘤细胞(OCM-1)共培养后,细胞形态、中心体表达及细胞骨架形态、结构情况.方法 对CECs与OCM-1 Transwell体系共培养后,通过倒置相差显微镜、HE染色观察CECs生长及形态变化;通过抗中心体γ-tubulin蛋白抗体和抗α-tubulin蛋白抗体免疫荧光染色,观察内皮细胞中心体形态和数量,细胞骨架形态和结构.结果 实验组(CECs与OCM-1共培养)CECs形态基本规则,较空白对照组(CECs单独培养)和阳性对照组(CECs与基质细胞共培养)细胞密度高;免疫荧光染色显示,贴近细胞核边缘有清晰的一到两个中心体,细胞显示结构形态规则的细胞骨架.结论 CECs与OCM-1共培养后细胞形态、中心体、细胞骨架形态和结构未见明显异常.
关键词： 角膜内皮细胞 OCM-1 Transwell共培养 中心体 -
氧糖剥夺-再灌注星型胶质细胞内皮素-1过表达对神经干/祖细胞增殖的影响
目的 探讨氧糖剥夺-再灌注(OGD-R)星型胶质细胞内皮素(ET)-1过表达对神经干/祖细胞(NSPCs)增殖的影响.方法 构建阴性对照星型胶质细胞(C6-Mock)和ET-1过表达的星形胶质细胞(C6-ET-1)OGD-R模型,并构建星型胶质细胞与NSPCs Transwell共培养体系.对星型胶质细胞及原代NSPCs进行形态观察及鉴定;将细胞分为以下4组进行共培养:C6-Mock+NSPCs组,OGD-R+C6-Mock+NSPCs组,C6-ET-1+NSPCs组,OGD-R+C6-ET-1+NSPCs组,共培养0、24、48、72 h,分析各组NSPCs神经球直径.结果 C6-Mock及C6-ET-1均呈现Ⅰ型星型胶质细胞的纤维状形态,神经胶质酸性纤维蛋白(GFAP)表达于这两种细胞的胞质中.原代NSPCs的巢蛋白(nestin)染色阳性.共培养后的48 h及72 h,OGD-R+C6-Mock+NSPCs组神经球的直径明显大于C6-Mock+NSPCs组的直径,OGD-R+C6-ET-1+NSPCs组神经球的直径明显大于C6-ET-1+NSPCs组的直径,同时OGD-R+C6-ET-1+NSPCs组神经球的直径明显大于OGD-R+C6-Mock+NSPCs组的直径,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 OGD-R星型胶质细胞促进NSPCs的增殖,且ET-1过表达进一步促进了NSPCs的增殖.
-
腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人RPE细胞对人脉络膜微血管内皮细胞增殖的影响
目的:观察腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial cells,RPE)细胞对人脉络膜微血管内皮细胞(human choroidal microvascular endothelial cell,HCMEC)增殖的影响,探讨Slit2在脉络膜新生血管中的可能作用,为脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)提供新的治疗思路.方法:体外培养并鉴定人RPE细胞、HCMEC;200 μmol/L氯化钴建立化学缺氧模型,Transwell小室建立细胞共培养模型;将缺氧的RPE细胞随机分为Slit2组(加入Slit2)、Slit2 ShRNA组(加入Slit2 ShRNA)、空腺病毒组(加入空腺病毒)、缺氧组,12、24、48 h后采用CCK 8(Cell Counting Kit-8,CCK 8)法检测HCMEC的增殖.结果:不同组别存在组间差别,差异均有统计学意义(F=98.122,P=0.000),不同时间点存在差别(F=3388.913,P=0.000),组别与时间点的交互作用(F=82.863,P=0.000).Slit2组吸光度(absorbance,A)值在24 h、48 h均高于其他组(与缺氧组P=0.001,其余P=0.000),Slit2 ShRNA组A值在24 h、48 h均低于其他组(48 h与缺氧组P=0.003,与空腺病毒组P=0.008,其余P=0.000).结论:Slit2的高表达可明显促进HCMEC的增殖,沉默RPE细胞中的Slit2的表达后,会明显抑制HCMEC的增殖.
-
间充质干细胞与巨噬细胞共培养体系的细胞因子表达模式研究
目的 比较外周血间充质干细胞(PBMSCs)和骨髓间充质干细胞(BMMSCs)与巨噬细胞(M0型)共培养后的细胞因子表达差异.方法 分离培养大鼠PBMSCs、BMMSCs和M0型巨噬细胞,采用Transwell培养体系分别进行PBMSCs和BMMSCs与M0共培养,同时还采用PBMSCs、BMMSCs和M0单独培养组作为对照.共培养3d后采用Bio-Plex免疫微球法对各组培养上清液中IL-10、IFN-γ、IL-1β、TNF-α细胞因子含量进行检测分析.结果 与PBMSCs组比较,PBMSCs+M0共培养上清液中的IL-10、IL-1β含量升高(P＜0.05),TNF-α的含量降低(P＜0.05),而IFN-γ的含量没有变化(P＞0.05);BMMSCs+M0共培养组的细胞因子表达变化模式同PBMSCs+M0共培养组,但变化程度均高于后者(P＜0.05).结论 PBMSCs和BMMSCs与M0共培养均可促进IL-10、IL-1β表达,抑制TNF-α的表达,且BMMSCs的调节能力强于PBMSCs,表明PBMSCs和BMMSCs均具有炎症免疫调节潜力并具有差异性,为间充质干细胞在不同疾病状态下的治疗应用提供了新的实验依据.
关键词： 外周血 间充质干细胞 巨噬细胞 Transwell共培养 细胞因子
