首页 > 文献资料
-
不同诱导时间下大鼠脂肪间充质干细胞成骨的差异
目的:观察诱导时间的不同对大鼠脂肪间充质干细胞分化为成骨细胞的影响.方法:脂肪间充质干细胞(ADSCs)分诱导组和非诱导组.诱导组在细胞接种同时(A组)、50%-60%融合时(B组)、85%-95%融合时(C组)分别加入同一浓度的由地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠.非诱导组的A、B、C组由普通培养基培养不加入诱导剂.结果:经钙钴染色后,诱导组大部分细胞呈阳性反应,以细胞达85%-95%融合时的结节体积大.非诱导组未见片状阳性细胞.茜素红染色后可见红色结节,以细胞迭85%-95%融合时诱导培养组形成结节较早.细胞内碱性磷酸酶活性检测表明诱导组与同期非诱导组相比细胞内碱性磷酸酶活性明显提高.结论:ADSCs经过诱导后,可向成骨细胞方向分化;诱导组细胞内碱性磷酸酶活性明显高于同期非诱导组;初始接种密度相同的情况下,ADSCs间相互接触程度越高,成骨能力越强.
-
兔不同部位脂肪间充质干细胞成骨能力的差异
目的 观察兔不同部位来源的脂肪间充质干细胞(ADSCs)分化成骨的能力.方法 分别从一只新西兰兔的腹股沟、腹膜后、颈背部取出脂肪组织并提取脂肪间充质干细胞,体外培养传至第5代,加入诱导剂分别进行成骨诱导,不加入诱导剂的为对照组.观察通过钙钴染色、茜素红染色、碱性磷酸酶活性检测细胞成骨能力.结果 经钙钴染色及茜素红染色后,诱导组大部分细胞呈阳性反应,以腹股沟部脂肪间充质干细胞的结节体积大,对照组未见明显阳性细胞 .细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性检测表明诱导组比对照组ALP活性明显升高(P＜0.05)；腹股沟部脂肪间充质干细胞ALP活性较颈背部及腹膜后高,差异有统计学意义(P＜0.05)；颈背部与腹膜后相比较无明显差异(P＞0.05).结论 兔ADSCs经过体外诱导后,具有成骨能力；腹股沟部脂肪可作为骨组织工程种子细胞来源的较佳取材部位.
-
胰岛素样生长因子-1对rhBMP-2诱导下成纤维细胞增殖及成骨转化的影响
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在重组人骨形态蛋白2(rhBMP-2)诱导成纤维细胞(Fb)转化为成骨细胞过程中是否具有促进作用.方法 从成年新西兰大白兔背部皮肤中分离、纯化提取成纤维细胞,然后培养.将细胞分为空白对照组、rhBMP-2干预组和IGF-1+rhBMP-2干预组.空白对照组:常规培养液培养,不加入任何诱导剂及干预因子;rhBMP-2干预组:常规培养液中加入100μg/L的rhBMP-2;IGF-1+rhBMP-2干预组:常规培养液中加入100μg/L的rhBMP-2与终浓度为50μg/L的IGF-1.定期在倒置显微镜下观察Fb生长状况,并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,同时行碱性磷酸酶(ALP)活性检测、茜素红染色及钙钴染色评价其成骨分化的能力.结果 与其他2组相比,IGF-1+rhBMP-2组细胞增殖速度快,周期短,MTT法检测示细胞生长旺盛,而空白对照组与rhBMP-2干预组之间无显著性差异.rhBMP-2干预组ALP表达高于空白对照组;而IGF-1+rhBMP-2组ALP表达明显高于其他2组.茜素红染色空白对照组未见明显钙化结节,rhBMP-2干预组细胞可见红色钙化结节,而IGF-1+rhBMP-2组钙化结节数目明显较rhBMP-2干预组多,面积增大.钙钴染色:rhBMP-2干预组和IGF-1+rhBMP-2干预组细胞胞浆中均可见浅棕色至棕黑色的细胞颗粒,但以IGF-1+rhBMP-2干预组棕黑色颗粒较多.空白对照组未见明显阳性细胞.结论 Fb在体外一定条件下经过诱导剂诱导后,可向成骨细胞方向转化.IGF-1可以促进Fb在rhBMP-2诱导下的增殖及成骨表型表达.
关键词： 成纤维细胞 胰岛素生长因子-1 重组人骨形态蛋白-2 成骨转化 细胞增殖 -
外源性Ⅵ型胶原对人后纵韧带细胞增殖和成骨转化的影响
目的 观察外源性Ⅵ型胶原蛋白(collagen Ⅵ,CⅥ)对人后纵韧带细胞增殖和成骨转化的影响.方法 取颈椎后纵韧带骨化症(ossification of the posterior longitudinal ligament,OPLL)患者手术切除的后纵韧带未骨化部分和非OPLL患者因外伤手术切除的正常后纵韧带,原代培养至第3代细胞,分别记作O细胞和N细胞;两种细胞均采用0、6.25、12.5、25、50、100μg/mlCⅥ刺激;CCK8法测定刺激后两种细胞1～7天光密度(D)值,评价CⅥ对细胞增殖的影响;骨形态生成蛋白-2 (BMP-2)对不同浓度CⅥ刺激的细胞进行诱导骨化,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞成骨细胞转录因子-2(RunX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)的基因表达情况.结果 CⅥ对两种细胞的增殖均起促进作用,且随着CⅥ浓度增加,其对细胞增殖的促进作用随之增强,但达到一定浓度后这种作用会保持不变或减弱,同一时间点内50μg/ml CⅥ刺激时两种细胞的D值大;BMP-2诱导后的两组细胞有CⅥ刺激的ALP、RunX2和OC的基因表达均高于无CⅥ刺激的对照组(P＜0.05);在无CⅥ刺激的情况下,O细胞的基因表达高于N细胞(P＜0.05).结论 CⅥ能够促进人后纵韧带细胞的增殖和成骨转化,而来自后纵韧带骨化患者的细胞则更易被促进增殖和诱导骨化,CⅥ可能具有促进后纵韧带细胞成骨的功能.
-
雌激素在骨髓间质干细胞转化为成骨细胞中的作用
骨髓间质干细胞(MSCs)具有多项分化的功能,在一定的条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞[1].促进骨髓间质干细胞向成骨转化,成为治疗骨质疏松症的新思路,日益引起越来越多人的关注.
-
辛伐他汀诱导促进骨形成蛋白-7基因修饰的兔间充质干细胞的成骨转化
目的:研究辛伐他汀诱导对骨形成蛋白-7(BMP-7)基因修饰的间充质干细胞(MSCs)增殖和分化表型的影响.方法:将辛伐他汀诱导和未经诱导的免MSCs分别转导BMP-7基因后,Western blotting检测转导后细胞BMP-7的表达:通过观察细胞生长以及碱性磷酸酶活性和测定骨钙素含量,分析辛伐他汀诱导对BMP-7基因修饰的MSCs的增殖和分化表型的影响.结果:转导后BMP-7基因在诱导组和未诱导组MSCs中均有表达,诱导组细胞BMP-7表达量、碱性磷酸酶活性和骨钙素含量均比较未诱导组明显增高.结论:转导前辛伐他汀诱导能够促进BMP-7基因修饰的MSCs的成骨转化.
-
地塞米松诱导促进BMP-2基因转染的兔MSCs的成骨转化
目的: 研究地塞米松诱导对BMP-2基因修饰的rMSCs的增殖和分化表型的影响.方法: 将地塞米松诱导和未经诱导的兔MSCs分别转导BMP-2基因后,以RT-PCR和免疫组化方法检测转导后细胞BMP-2的表达;通过观察细胞生长及碱性磷酸酶活性和骨钙素含量的测定,分析地塞米松诱导对BMP-2基因修饰的rMSCs的增殖和分化表型的影响.结果: 转导后BMP-2基因在两组rMSCs中均有表达,定量分析显示诱导组细胞碱性磷酸酶活性(134.36±8.84) nkat/L较对照组(104.02±7.83) nkat/L明显增高;诱导组细胞骨钙素含量(14.68±0.73) μg/L较对照组(6.52±1.21) μg/L明显增高.结论: 转导前地塞米松诱导能够促进BMP-2基因修饰的rMSCs的增殖和成骨转化.
关键词： 骨髓细胞 干细胞 骨形态发生蛋白2基因 地塞米松 成骨转化
