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miRNA-133b-3p对PC12细胞P2rx4的表达调控及细胞钙活动的实验观察
目的:从离体细胞水平观察miRNA-133b-3p调控P2rx4表达对神经元钙活动的影响.方法:用转染试剂将miRNA-133b-3p mimic和miRNA-133b-3p inhibitor转入PC12细胞中.转染48 h后,用荧光定量PCR的方法检测PC12细胞中miRNA-133b-3p的含量,P2rx4 mRNA的表达变化;用免疫印迹的方法检测P2rx4受体蛋白的表达变化;用胞内钙成像技术检测ATP孵育后细胞中钙离子浓度的变化.结果:转染48 h后,与阴性对照组相比,加入miRNA-133b-3p mimic后PC12细胞中miRNA-133b-3p的含量明显增加,P2rx4 mRNA和P2rx4蛋白的表达减少,ATP孵育后细胞中钙离子浓度的升高明显减弱.转染inhibitor后,细胞内miRNA-133b-3p的含量明显减少,P2rx4 mRNA和P2rx4蛋白的表达增加,ATP孵育后胞内钙离子浓度的升高明显增强.结论:miRNA-133b-3p通过负向调控P2rx4的表达来影响细胞钙活动.
关键词： PC12细胞 miRNA-133b-3p P2rx4 钙活动 表达调控 -
心脏收缩调节刺激对心肌细胞钙动力学的影响
目的 通过计算机理论模拟心肌细胞电生理模型,在心肌动作电位(AP)绝对不应期内施加非兴奋性电刺激,观察胞内自由钙离子浓度变化及心脏收缩调节.方法 在人心室细胞电生理模型的基础上,根据近年相关实验成果,通过改造以模拟衰竭心肌细胞的电生理特性.结果 改造后模型的AP和胞内钙浓度变化,和l}缶床发现非常相似.心脏收缩调节刺激大大增强了钠一钙交换器活性,在AP间期更多的钙离子经过此交换器进入胞内,逐拍提高了肌浆网内的钙浓度峰值,因而下一搏中有更多的钙离子释放到胞浆中,从而逐渐提高了细胞内的自由钙浓度,后收敛于一个稳定值,AP的延长和胞内钙活动密切相关.结论 适宜的AP绝对不应期刺激能提高肌浆网内钙的集聚,增强心肌收缩.
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内嗅皮层-海马投射末梢基于光纤技术的钙活动记录
目的 运用光纤探测系统建立轴突末梢Ca2活动的光学记录方法,并初步探究麻醉和自由活动状态下小鼠皮层-海马通路的活动规律.方法 向8 ～ 10周龄雄性C57BL/6小鼠内侧内嗅皮层(medial entorhinal cortex,MEC)浅层(Ⅱ层)注射神经元特异并携带Ca2+荧光指示蛋白基因的腺相关病毒(AAV-Syn-GCaMP5 G),继续饲养1个月后将光纤植入到海马齿状回(dentate gyms,DG)分子层上沿,记录麻醉和自由活动状态下轴突末梢的Ca2+活动;相同方法记录AAV-Syn-增强绿色荧光蛋白(eGFP)小鼠作为对照.向MEC浅层注射河豚毒素(tetrodotoxin,TTZ),同步记录轴突末梢Ca2活动,注射人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)作为对照.结果 内嗅皮层Ⅱ层神经元投射至海马DG的轴突纤维密集表达GCaMP5G.在麻醉和自由活动的小鼠中均能稳定记录到轴突末梢Ca2+信号,eGFP对照小鼠未记录到类似Ca2+信号.MEC浅层注射TTX后,轴突末梢Ca2信号100 s内高幅度降至注射前的12.6％.与ACSF比较,TTX对轴突末梢Ca2+活动有明显阻断作用(P＜0.01).内嗅皮层投射至DG的轴突末梢处Ca2+活动在麻醉状态下以一定节律同步发放,自由活动状态下则表现为无节律非同步发放,且Ca2+信号幅度有所增强.结论 通过GCaMP5G特异标记了内侧内嗅皮层Ⅱ层投射至DG的轴突纤维,并运用光纤探测系统建立了长远投射轴突末梢Ca2+活动的光学记录方法.与麻醉状态相比,自由活动状态下内嗅-海马通路呈现更强的Ca2+活动发放.
