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血管内皮生长因子对肾小管上皮-间充质细胞转化的作用及其与骨形成蛋白-7、分化抑制因子表达的关系
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)对肾小管上皮一问充质细胞转化(EMT)的作用及其与骨形成蛋白-7(BMP-7)、分化抑制因子(Id)2、Id3表达的关系.方法 体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)经转化生长因子-β1(TGF-β1,5 ng/ml)与不同浓度VEGF165(0.1、1、10、100 ng/ml)共同作用,或TGF-β1(5 ng/m1)与血管内皮生长因子受体-1(VEGFRl)抗体(10μg/ml)共同作用48 h后,免疫组织化学双染方法 检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素表达,实时荧光定量PCR法、Western blot法检测细胞α-SMA、BMP-7、Id2和Id3的表达.TGF-β1(5ng/ml)、VEGF165(100 ng/ml)与激活素受体样激酶-6/Fc嵌合体(Alk6/Fc Chimera)(2 μg/ml,中和内源性BMP-7)共同作用48 h后,Western blot法检测细胞α-SMA、Id2的表达情况.结果 TGF-β1作用后,β-SMA表达比正常对照显著增强(P＜0.05),E-钙黏素、BMP-7、Id2及Id3的mRNA及蛋白质表达均显著减弱(P＜0.05).VEGF165以浓度依赖方式增强BMP-7及Id2蛋白表达,而显著降低TGF-β1上调α-SMA表达的作用(P＜0.05).加入VEGFR1抗体(10μg/ml)后,TGF-β1上调α-SMA表达的作用显著增强(P＜0.05),而E-钙黏素、BMP-7、Id2表达显著减弱(P＜0.05).TGF-β1+VEGF165+Alk6/Fc Chimera共同作用后α-SMA蛋白表达比TGF-β1+VEGF165共同作用后显著增强(P＜0.05),而Id2表达差异无显著性.结论 VEGF165可抑制TGF-β1诱导HK-2细胞发生EMT;其机制可能与BMP-7和Id2表达上调有关,而与Id3表达变化无关.Id2表达增强可能与VEGF165的直接作用有关,而与BMP-7无关.
关键词： 血管内皮生长因子 上皮-间充质细胞转化 骨形成蛋白7 分化抑制冈子
