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亚砷酸钠对Chang肝细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨亚砷酸钠对正常人Chang肝细胞体外增殖及凋亡的影响.方法 采用0(对照)～100 μmol/L亚砷酸钠分别处理细胞24、48、72、96 h.采用MTT比色法检测细胞活力；采用流式细胞术检测染毒48 h时的细胞凋亡率.结果 仅0.2μmol/L亚砷酸钠染毒24 h的细胞活力略高于对照组,但差异无统计学意义；且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高和染毒时间的延长,Chang肝细胞存活率均呈下降趋势,并具有剂量-效应和时间-效应关系.与对照组相比较,5～100 μmol/L亚砷酸钠染毒组Chang肝细胞凋亡率均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05)；且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,Chang肝细胞的凋亡率呈显著升高趋势,并具有剂量-效应关系.结论 亚砷酸钠有明显的细胞毒性,能抑制Chang肝细胞的增殖,这可能与其诱导细胞凋亡有关.
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无机砷对Chang肝细胞活性氧的诱导和核转录因子表达的影响
目的 研究亚砷酸钠(NaAsO2)对Chang肝细胞中活性氧(ROS)的诱导以及对核转录因子Nrf2的活化作用.方法 体外实验采用0～10μmol/L NaAsO2溶液对Chang肝细胞染毒2、6、12和24 h.分别用流式细胞仪和免疫印记实验(Westernblot)技术检测细胞内ROS含量和Nrf2蛋白的表达.结果 2.5lμmol/LNaAs02溶液染毒6h、5.0Ixmol/LNaAsO2 溶液染毒2、6、12、24 h的平均荧光强度的相对比值均高于对照组,差异有统计学意义(P(0.05或P＜0.01);且ROS的产生量随着NaAsO2溶液浓度的升高而增多.5.0 μmol/L NaAsO2溶液染毒12 h、5.0 μmol/L NaAsO2溶液染毒2、6、12 h的核转录因子Nrf2蛋白表达均强于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);且核转录因子Nrf2蛋白表达的活化具有时间相关性,即在NaAsO2溶液染毒12 h时核转录因子Nrf2蛋白表达的活化出现高峰,而后逐渐降低至正常水平.结论 无机砷能够诱导Chang肝细胞内ROS的生成和增强核转录因子NIf2蛋白的表达.
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人Chang肝细胞对亚砷酸钠蓄积和甲基化能力的研究
目的 探讨Chang肝细胞对砷的蓄积和甲基化能力.方法利用超低温捕集-氢化物发生-原子吸收分光光度法测定不同浓度(0.1、0.2、0.5 μmol/L)亚砷酸钠染毒条件下Chang肝细胞在培养24、48和72h时,细胞内和培养液中的不同形态砷化物含量.结果 同一染毒水平下,Chang肝细胞对砷的蓄积率随染毒时间的延长上升(P<0.05);24h各染毒剂量组对砷的蓄积率差异无统计学意义(P>05);48h0.1和0.2μmol/L染毒组对砷的蓄积率显著高于0.5μmol/L染毒组(P<0.05);72h0.1μmol/L染毒组对砷的蓄积率显著高于0.2和0.5μmol/L染毒组(P<0.05);72h0.1μmol/L染毒组细胞对砷的蓄积率高,为13.78%.同等染毒剂量下,细胞对砷的甲基化率随染毒时间延长而升高(P<0.05);同一染毒时段,0.5μmol/L染毒组细胞甲基化率显著低于0.1和0.2μmol/L染毒组(P<0.05).结论 Chang肝细胞对砷的蓄积和甲基化能力较弱,且随染毒剂量升高,Chang肝细胞对砷的蓄积和甲基化能力呈下降趋势.
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亚砷酸钠联合丁基硫堇亚胺致肝细胞毒性作用
目的 研究亚砷酸钠(sodium arsenite,NaAsO_2)单独、以及与丁基硫堇亚胺(buthionine sulfoximine,BSO)联合对Chang liver细胞毒性作用.方法 常规培养的Chang liver细胞用NaAsO_2单独或NaAsO_2和BSO联合染毒24 h,倒置相差显微镜采集细胞图像;四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力.结果 NaAsO_2(0～250μmol/L)明显改变Chang liver细胞的形态并明显降低细胞生存率(P＜0.01),且呈剂量-反应关系;NaAsO_2(5,20μmol/L)和BOS(1 mmol/L)联合作用,其细胞生存率明显低于相应浓度的NaAsO_2单独作用组(P＜0.01).结论 NaAsO_2具有明显的细胞毒性;NaAsO_2联合BSO能够加重NaAsO_2对Chang liver细胞的毒性.
关键词： 亚砷酸钠 丁基硫堇亚胺(BSO) Chang肝细胞 -
无机砷的肝细胞毒性和氧化应激
为研究亚砷酸钠(NaAsO2)的肝细胞毒性和氧化应激作用.NaAsO2(5、10、20、40、80、100和200μmoL/L)染毒24 h,用AlamarBlue法检则细胞活力;NaAsO2(2.5、5、10和25 μmol/L)染毒24 h,或NaAsO2(10 μmoL/L)染毒2 h、6 h、12 h和24 h,用流式细胞术检测细胞内2',7'-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)的荧光强度,间接反应细胞内氧化应激水平.结果NaAsO2(5-200μmol/L)染毒24 h能够显著降低Chang肝细胞的细胞活力,且具有剂量-效应关系(P<0.01);不同剂量NaAsO2(2.5、5和10 μmoL/L)染毒24 h,细胞内荧光强度明显增高,分别是对照组的1.67、1.96和2.30倍(P<0.01);而浓度10 μmoL/L的NaAsO2染毒组,细胞内荧光强度在12 h和24 h均显著高于对照组(P<0.01).提示无机砷能够产生肝细胞毒性,增强细胞内的氧化应激水平,并且具有剂量和时间反应关系.
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多种砷化物对Chang肝细胞抗氧化酶的诱导作用
目的 探讨不同无机砷和有机砷化物对Chang肝细胞的毒性,以及对Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶蛋白的诱导作用.方法 采用Alamar Blue还原法测定细胞活力;Western blot免疫印迹法检测细胞内HO-1、NQO1、GST和GR的蛋白表达.结果 通过Alamar Blue还原法测定细胞增殖活力,几种砷化物的毒性大小依次为As2O3＞NaAsO2＞ Na2HAsO4＞DMA;不同浓度的无机砷染毒Chang肝细胞6h后,发现随着染毒浓度的升高,HO-1和NQO1的蛋白表达水平逐渐增加;GST和GR的蛋白表达与染毒浓度无关,3个组都表达且相同;而有机砷DMA正相反,随着染毒浓度的升高,GST和GR的蛋白表达水平逐渐增加,HO-1、NQO1的蛋白表达水平与染毒浓度无关,染毒组与对照组相比无差异.结论 不同砷化物对肝细胞的毒性不同;对于抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶的蛋白表达,4种砷化物的针对性和诱导强度明显不同.
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砷酸钠对 Chang 肝细胞 Nrf2信号通路的影响
目的 探讨五价砷酸钠暴露对Chang肝细胞核转录因子- E2类相关因子2(Nrf2)及其调控的下游抗氧化酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1( NQOI)和血红素单加氧酶-1(HO-1)的mRNA及其蛋白表达的影响.方法 0.5、1.0、2.0mmol/L的砷酸钠( Na2 HAsO4)染毒Chang肝细胞6h后,采用western blot法检测细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达情况；采用抗氧化反应元件(ARE)-荧光素酶活性检测Nrf2的转录活性情况；采用Real-time PCR检测细胞NQO1和HO-1的mRNA表达情况.结果 0.5、1.0、2.0 mmol/L的Na2HAsO4染毒6h均能够显著诱导Chang细胞的Nrf2蛋白表达(P＜0.05),ARE荧光素酶活性水平也随染毒剂量的增加而诱导,并且具有剂量-效应关系；随着染毒剂量的升高,HO-1和NQO1的mRNA及蛋白水平逐渐升高,与对照组相比具有统计学差异,并且具有剂量-效应关系(P＜0.01).结论 砷酸钠暴露能够诱导人类Chang肝细胞的Nrf2及其调控的下游抗氧化酶NQO1和HO-1的mRNA及其蛋白的表达.
关键词： Chang肝细胞 砷酸钠 核转录因子- E2类相关因子2 -
无机砷对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1mRNA和蛋白表达的诱导作用
[目的]观察亚砷酸钠(sodium arsenite,NaAsO2)对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA和蛋白表达的诱导作用.[方法]以5μmol/L和10μmol/L的NaAsO2作用Chang肝细胞株2、6、12h和24h,分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot法检测细胞内HO-1的mRNA和蛋白表达情况.[结果]5μmol/L和10μmol/L NaAsO2暴露2h开始出现HO-1 mRNA的诱导表达;6h的表达水平明显高于对照组和2h暴露组(P<0.01).其中,10gmol/LNaAsO2暴露12h和24h的mRNA表达均明显高于该浓度的6h暴露组(P<0.01);但24h的HO-1 mRNA表达水平与12h组相比没有明显升高.NaAsO2暴露诱导的HO-1蛋白表达则从6h开始出现,12h组明显高于6h组,24h组明显高于12h组(均P<0.01);5μmol/L和10μmol/L NaAsO2分别暴露6、12h和24h的HO-1蛋白表达量分别是对照组的2.80、9.34、18.15和3.97、12.92、23.29倍;此外,10μmol/L NaAsO2暴露12h和24h的HO-1 mRNA和蛋白表达均明显高于对应时间的5μmol/L组(P<0.01).[结论]NaAsO2暴露能够有效和持续性诱导Chang肝细胞株HO-1的mRNA和蛋白表达,是无机砷暴露的一种细胞保护性适应性反应.
