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急性脑梗死发病与低氧诱导因子-1a的相关性分析
目的 分析急性脑梗死发病与低氧诱导因子-1a(HIF-1a)的相关性.方法 选取2015年7月-2016年8月于我院进行诊疗的急性脑梗死患者62例为观察组.另取同期健康体检者62例为对照组.对比两组在不同时间点的血清HIF-1a浓度.根据脑梗死面积大小将观察组患者分为小面积梗死组以及大面积梗死组,对比不同时间点两组HIF-1a浓度,并作相关性分析.结果 在不同时间点,观察组HIF-1a浓度均显著高于对照组(P<0.05).小面积梗死组患者在1 d、3 d、5 d及7 d时的血清HIF-1a浓度均显著低于大面积梗死组(P<0.05).血清HIF-1a浓度与脑梗死面积存在显著正相关关系(r=0.754,P=0.000).结论 HIF-1a参与了急性脑梗死的发生、发展过程,且与患者梗死面积存在显著正相关.
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低氧对胚胎干细胞增殖的影响
目的:观察间歇性低氧和持续性低氧对体外培养的胚胎干细胞(ES细胞)增殖的影响.方法:利用细胞记数法和BrdU (5-溴脱氧尿苷)掺入的流式细胞分析检测细胞增殖,并用RT -PCR的方法检测低氧诱导因子(HIF-1a)的表达变化.结果:①将ES细胞分别放在低氧(3%～10% O2)和常氧(20% O2)的环境中培养24 h后,在低氧环境中培养的ES细胞数较常氧组明显减少;②将ES细胞分别给予间歇性低氧刺激(3%～10% O2),每天10 min,连续4 d后,发现3%低氧组较常氧对照组的细胞增殖明显升高.③用RT-PCR方法观察HIF-1a的表达与细胞增殖的关系,发现在常氧环境中培养的ES即有HIF-1a的表达,ES细胞在持续低氧24 h或间歇性低氧(3%～10% O2)刺激4 d后对HIF-1a的表达均无明显影响.结论:间歇性低氧(3% O2)可明显促进体外培养的ES细胞增殖,而持续性低氧抑制ES细胞增殖,间歇性低氧(3% O2)刺激促进ES细胞增殖的机制尚有待于进一步的研究.
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胃泌素促进人脐静脉血管内皮细胞增殖和管状结构生成
目的 研究胃泌素对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)体外增殖和管状结构形成的作用.方法 免疫细胞化学等检测HUVEC中胃泌素受体(CCK-BR)的表达;用10和100 nmol/L胃泌素处理HUVEC后,MTT和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖能力,小管形成实验观察HUVEC管状结构生成情况；实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测HUVEC中血管内皮生长因子(VEGF)和低氧诱导因子-1a(HIF-1a)基因的表达.结果 HUVEC表达CCK-BR,经10和100nmol/L胃泌素处理后,细胞增殖率和克隆形成率显著增加(P＜0.01),细胞中VEGF和HIF-1a基因的表达量高于对照组(P＜0.01),HUVEC形成的半环状和环状管状结构数也高于对照组(P＜0.01).结论 胃泌素与HUVEC表达的CCK-BR结合后,上调VEGF和HIF-1a基因的表达,促进HUVEC体外增殖及管状结构的形成能力.
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低氧诱导因子-1a、血管内皮生长因子及其受体在胰腺癌中的表达和预后
目的 探讨胰腺癌组织中低氧诱导因子-1a(HIF-1a)、血管内皮生长因子(VEGF)及VEGF受体1(VEGFR1)、受体2(VEGFR2)对胰腺癌微血管密度(MVD)的影响,以及这些蛋白的表达与胰腺癌根治性手术后患者生存期的关系.方法 收集2008年1月-2012年5月在上海交通大学医学院附属仁济医院普外科行胰十二指肠切除术的50例胰腺癌患者的胰腺癌组织病理标本,并随机取其中15例患者的胰腺阴性切缘组织作为对照.采用免疫组织化学法检测胰腺癌组织、阴性切缘组织中HIF-1a、VEGF、VEGFR1、VEGFR2的表达水平.以CD34单克隆抗体显示肿瘤微血管内皮细胞,计算肿瘤内MVD.结果 共随访45例,随访率为90％.胰腺癌组织中HIF-1α、VEGF、VEGFR1、VEGFR2阳性率分别为82.0％、84.0％、80.0％和84.0％,均显著高于阴性切缘组织的46.7％、26.7％、0、13.3％(P值均＜0.05).胰腺癌组织中,HIF-1α与VEGF(r=0.564)、VEGFR1(r=0.301)、VEGFR2 (r=0.310)、MVD(r=0.443)呈正相关(P值均＜0.05),VEGF与VEGFR1 (r=0.383)、VEGFR2 (r=0.342)呈正相关(P值均＜0.05),VEGFR1与VEGFR2呈正相关(r=0.851,P＜0.05).胰腺癌组织中,VEGF(r=0.836)、VEGFR1 (r=0.339)、VEGFR2(r=0.284)与肿瘤MVD均呈正相关(P值均＜0.05).结论 胰腺癌组织中HIF-1α影响肿瘤分化,能促进VEGF、VEGFR1、VEGFR2表达,诱导肿瘤新生血管形成,增加MVD,促进肿瘤生长,影响患者术后的生存期.
关键词： 胰腺癌 低氧诱导因子-1a 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体 -
鱼藤素抑制糖尿病大鼠视网膜中低氧诱导因子-1a(HIF-1a)的表达研究
目的 鱼藤素抑制糖尿病大鼠视网膜中低氧诱导因子-1a(HIF-1a)的表达.方法 (1)健康SD大鼠35只进行完全随机化分组,10只SD大鼠为对照组,25只SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)60mg/kg建立糖尿病模型组.(2)从造模成功第1周始,每隔1周糖尿病模型组右眼玻璃体腔注射鱼藤素(右眼作为实验眼组),左眼玻璃体腔注射缓冲液(左眼作为糖尿病眼组);健康大鼠对照组双眼(正常眼组)玻璃体腔注射缓冲液.(3)各组大鼠10周后取视网膜进行免疫组化及ELISA法测定HIF-1a表达.结果 免疫组化示实验眼组和糖尿病眼组视网膜中HIF-1a阳性细胞表达数均比正常眼组多,同时实验眼组大鼠视网膜中HIF-1a阳性细胞表达数低于糖尿病眼组.ELISA法测得糖尿病眼组与实验眼组视网膜组织中的HIF-1a含量皆高于正常眼组(P<0.05),而实验眼组含量低于糖尿病眼组(P<0.05).结论 鱼藤素可抑制糖尿病大鼠视网膜中HIF-1a的表达,说明鱼藤素在早期糖尿病大鼠视网膜病变中起到保护作用.
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三突变型低氧诱导因子-1α对人微血管内皮细胞增殖及VEGF蛋白表达的影响
目的 观察重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1cα(HIF-1α)对人微血管内皮细胞(hMVECs)增殖及VEGF蛋白表达的影响.方法 三突变型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1α564/402/803)、野生型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1αnature)、Ad-LacZ及空载腺病毒载体(Ad-Null)分别在HEK293A细胞大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,终点稀释法测定病毒滴度；双荧光素酶报告系统检测三突变型HIF-1α与野生型HIF-1α的转录活性；各重组腺病毒载体以佳转染复数转染体外培养的hMVECs,Westem blotting测定HIF-1α和VEGF蛋白表达；MTS检测Ad-HIF-1α564/402/803对细胞增殖的影响.结果 三突变型HIF-1α转录活性显著高于野生型HIF-1α(P＜0.001):Ad-HIF-1α564/402/803组HIF-1α和VEGF蛋白表达量高于Ad-HIF-1αnature及其他组；VEGF蛋白表达水平与HIF-1α呈剂量依赖关系.Ad-HIF-1α564/402/803组第3、5天吸光度值均显著高于Ad-HIF-1αnature及其他组(P＜0.01).结论 三突变型HIF-1α在体外常氧条件下稳定高效表达,可诱导hMVECs VEGF蛋白表达上调,促进hMVECs增殖.
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老龄大鼠脑组织不同部位HIF-1α的表达规律探讨
目的 观察低氧诱导因子-1a(HIF-1a)在老龄大鼠脑组织不同部位的表达规律,探讨FIF-1a在神经系统衰老过程中的作用.方法 应用尼氏染色和免疫组化技术对比观察3月龄和30月龄大鼠脑组织不同部位神经细胞内尼氏体及HIF-1a的表达情况.结果 30月龄大鼠脑组织各部位神经细胞体积大,排列稀疏,胞浆内尼氏体稀疏.与3月龄组比较,30月龄组大鼠脑组织内各部位阳性表达细胞数目明显增多(P<0.01),且各部位阳性细胞个数有显著变化(P<0.01),其中海马CA3区阳性细胞数多,而运动皮质区及第1小脑小叶阳性细胞数相对较少.结论 老龄大鼠脑组织各部位神经细胞蛋白质合成功能减弱,而HIE-1a表达增强,其中又以海马区表达强,推测HIF-1a可能在衰老过程中尤其是记忆减退方面发挥重要作用.
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氯化钴对甲状腺乳头状癌NPA细胞上皮间质转化的影响及其机制
目的 研究氯化钻( CoCl2)诱导的低氧对甲状腺乳头状癌NPA细胞上皮间质转化的影响,初步探讨HIF-1α在其中的机制.方法 MTT检测COCl2(50、100、150、200、250 μmol/L)对细胞活力的影响,倒置显微镜观察低氧(150μmoL/L的CoCl2分别作用0、12、24、48 h)对细胞形态的影响,Western blot检测低氧(150 μmol/L的CoCl2分别作用0、3、6、12、24h)对HIF-1α、E-cadherin和Vimentin表达的影响,Transwell法检测低氧(150 μmol/L的CoCl2分别作用0、6h)对细胞侵袭、转移的影响,用免疫荧光对HIF-1α蛋白进行亚细胞定位.结果 低氧模拟剂CoCl2可抑制NPA细胞活力.随着COCl2低氧处理时间的延长,NPA细胞逐渐获得间质细胞的形态特征,HIF-1α、Vimentin表达在0～6h逐渐增加,随后开始下降,E-cadherin表达持续降低,低氧0h与6h相比各蛋白表达均具有统计学差异(P＜0.01).低氧组侵袭、转移细胞数目较对照组明显增加(P＜0.01),同时低氧组细胞HIF-1α发生核转位.结论 CoCl2模拟化学性低氧可促进NPA细胞上皮间质转化及侵袭、转移,其分子机制可能涉及HIF-1α介导的信号通路对E-cadherin、Vimentin基因表达的调控.
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脐血高迁移率族蛋白-1、低氧诱导因子-1a、神经元特异性烯醇酶及脐动脉血气分析评价新生儿窒息的临床研究
目的 探讨脐血高迁移率族蛋白-1(HMGB1)、低氧诱导因子-1a(HIF-1a)、神经元特异性烯醇酶(NSE)及脐动脉血气分析指标评价新生儿窒息的临床价值.方法 选取60例窒息新生儿为研究对象,根据Apgar评分分为轻度组(46例)和重度组(14例),另选取同期出生的80例正常新生儿为对照组.分别检测各组新生儿脐动脉血气指标(pH、PaCO2、PaO2和BE)及脐血HMGB1、HIF-1a、NSE水平.结果 轻度组和重度组患儿脐血pH、PaO2和BE明显低于对照组,脐血PaCO2又高于对照组;且重度组和轻度组患儿各脐动脉血气分析结果比较,差异均具有显著性(P<0.05).轻度组和重度组患儿脐血HMGB1、HIF-1a、NSE水平明显高于对照组,而重度组患儿脐血HMGB1、HIF-1a、NSE水平又显著高于轻度组(P<0.05).相关性分析显示,窒息新生儿脐血HMGB1、HIF-1a、NSE水平与脐血PaCO2呈显著正相关(P<0.05),而与脐血pH、PaO2及BE均呈显著负相关(P<0.05).预后良好组窒息新生儿脐血HMGB1、HIF-1a和NSE水平均明显低于预后较差组,差异具有显著性(P<0.05).结论 脐血HMGB1、HIF-1a、NSE水平与新生儿窒息密切相关,结合动脉血气分析检测有助于新生儿窒息的早期诊断和预后判断.
