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灯盏乙素拮抗硒对人肝细胞L-02毒性的研究
目的研究灯盏乙素拮抗硒对人肝细胞株L-02毒性作用.方法采用噻唑蓝(MTT)法研究灯盏乙素和硒对L-02细胞生长的作用;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;测定丙二醛(MDA)、巯基含量和总抗氧化能力等氧化还原相关生化指标.结果 0.5mmol/L灯盏乙素与细胞作用48h时达到促细胞生长佳条件,且可以显著拮抗1,5μmol/L硒对L-02细胞生长的抑制作用;灯盏乙素和硒共同处理的细胞与仅用硒处理的细胞相比,细胞损伤程度明显减轻,MDA含量显著降低,巯基含量及体系抗氧化能力均显著增高.结论灯盏乙素通过抗脂质过氧化和提高细胞抗氧化能力拮抗硒对L-02细胞的毒性.
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来源于海洋真菌的Oxalicumone A诱导肝细胞L-02凋亡的毒性作用机制研究
目的 评价来源于海洋真菌Penicillium sp.的新药候选化合物Oxalicumone A(POA)对人正常肝细胞L-02的细胞毒性作用,初步探讨POA诱导其凋亡的作用机制.方法 以体外培养的L-02为实验对象,CCK-8检测细胞存活率;Hoechst 33258染色观察细胞形态学的改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率和增殖周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Fas、Bax以及Bcl-2的表达.结果 CCK-8检测结果表明,POA对L-02细胞有一定的时间、浓度依赖性的抑制作用;Hoechst 33258染色可见细胞出现核固缩、碎裂、浓染等典型的凋亡细胞形态学改变;流式细胞仪检测显示细胞早期凋亡率和Sub-G1、S、G2/M期出现了相应比例的增加;Western blot法表明POA显著增加了凋亡蛋白Fas、Bax表达(P＜0.05),降低了抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P＜0.05).结论 POA体外诱导L-02细胞毒活性,产生凋亡并经过线粒体信号通路,其作用机制与Bcl-2表达下调以及Fas、Bax表达上调有关.
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凋亡素基因在人肝细胞和肝癌细胞中的定位观察及对线粒体膜电位的影响
目的 观察转染的pEGFP-VP3融合基因在人肝细胞L-02及肝癌细胞HepG-2中的定位表达及其与线粒体膜电位关系的研究.方法 构建pEGFP-VP3融合基因,利用人源正常肝细胞株L-02及肝癌细胞株HepG-2,经Lipofectamine 2000转染细胞,在激光共聚焦显微镜下观察pEGFP-VP3融合基因的表达,DAPI染色成功观测该蛋白在细胞中的定位,线粒体膜电位染色观察膜电位的变化.结果 pEGFP-VP3融合基因转染后可观察到在人肝细胞L-02及肝癌细胞HepG-2细胞核中的高表达,及线粒体膜电位下降的改变.结论 凋亡素诱导线粒体途径的凋亡,为后期进一步研究VP3的凋亡机制及其抗肿瘤治疗奠定了基础.
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雷公藤甲素诱导肝细胞L-02凋亡的作用机制研究
目的:研究雷公藤甲素诱导肝细胞L-02凋亡的作用机制.方法:体外培养L-02细胞,MTT法检测雷公藤甲素对L-02细胞的毒性作用,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核形态的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测人抗兔p53、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)与线粒体、胞浆中细胞色素C(Cyt-c)的表达.结果:不同浓度雷公藤甲素(60、120、180 nmol/L)与同样浓度(120 nmol/L)不同作用时间(12、24、48 h)作用L-02细胞,雷公藤甲素对细胞的抑制作用与浓度或时间呈正相关；Hoechst 33258染色可见细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变；Western blot法显示120 nmol/L雷公藤甲素作用后,细胞p53 、Bax与胞浆中Cyt-c表达显著增强(P＜0.05),而Bcl-2与线粒体中Cyt-c表达显著减弱(P＜0.05).结论:雷公藤甲素体外可诱导L-02细胞凋亡,其作用机制可能与Bcl-2与线粒体中Cyt-c表达下调和p53、Bax与胞浆中Cyt-c表达上调有关.
