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SIRS大鼠心肌葡萄糖6磷酸酶活性的测定和线粒体形态变化
目的：对大鼠全身炎症反应综合征(SIRS)阶段心肌细胞胞浆内参与葡萄糖代谢的酶活性进行研究，并观察心肌细胞线粒体形态结构，从酶学及亚细胞结构的角度深入了解SIRS时心肌能量代谢的改变。方法：（1）腹腔注射内毒素(LPS)20 mg/kg，以直肠温度、心率、呼吸、血白细胞(WBC)、中性粒细胞数量及血肿瘤坏死因子α(TNFα，免疫组化法)含量变化作为SIRS的指标，制造大鼠SIRS的动物模型。（2）酶组织化学方法检测SIRS大鼠心肌细胞葡萄糖6磷酸酶，图像分析进行半定量测定其活性的变化。（3）SIRS大鼠球后静脉丛取血测血糖。（4）SIRS大鼠心肌细胞的透射电镜观察。结果：（1）注射LPS后1小时大鼠心肌细胞葡萄糖6磷酸酶活性较对照组明显增强，3小时后则明显减弱，差异性均显著（P均<0.05）。（2）注射LPS 1小时后血糖明显升高，3小时后降低。（3）透射电镜观察可见SIRS大鼠心肌细胞线粒体增多，排列紊乱，出现空泡变性，肌纤维水肿。结论：SIRS时存在葡萄糖代谢紊乱及能量代谢障碍，可能为SIRS时MODS的发生的重要原因。
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糖原累积病Ⅰa型的基因突变和临床研究
目的了解中国人葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)基因突变谱和突变热点,并分析糖原累积病Ⅰa型(GSD Ⅰa)基因型和临床表型的相关性.方法采用PCR、DNA序列分析、家系分析和限制性内切酶图谱分析等方法对21例GSDⅠ a患者G6Pase基因进行分析.结果42个G6Pase等位基因中,发现727G→T突变34个(80.95%),R83H突变4个(9.52%),R170X,Q104X和341delG突变各1个.21例患者中13例患者为727G→T纯合突变,8例为杂合突变,727G→T和R83H突变经限制性内切酶图谱分析证实.相同基因型的患者从发病年龄到血生化指标和症状的严重程度均有所不同,1例727G→T纯合突变患者发生肝腺瘤.结论通过分子生物学方法进行727G→T和R83H突变的筛查可发现近90%的G6Pase基因突变.根据GSD Ⅰ a典型的临床表型及生化指标结合突变检测,此筛查可取代有创性肝穿刺酶活性检测的确诊方法.
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抵抗素在肝脏胰岛素抵抗中的作用及其机制探讨
目的 探讨抵抗素在肝脏胰岛素抵抗中的作用及其可能的机制.方法 将载有抵抗素基因的重组腺病毒经尾静脉注射构建高抵抗素血症小鼠模型,同时设正常对照组及病毒对照组,取肝脏组织切片行PAS糖原染色半定量观察肝糖代谢变化;以Western blot检测肝腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化,以磷酸化AMPK/总AMPK的比值代表AMPK激活程度;以实时PCR检测肝组织糖异生关键酶葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEP-CK)mRNA表达水平的变化.结果 重组腺病毒注射d 5获得血中抵抗素高表达构建了高抵抗素血症动物模型,糖原染色示高抵抗素血症小鼠肝糖原含量较正常对照及病毒对照组降低(P<0.05);高抵抗素血症组肝AMPK磷酸化水平较正常对照及病毒对照组下降,磷酸化AMPK/总AMPK比值分别为0.78±0.06 vs 0.93±0.13,0.89±0.05(P<0.05).高抵抗素血症小鼠G6Pase和PEPCK的mRNA表达升高,G6Pase分别为2.136±0.857 vs 1.353±0.49,1.250±0.77;PEPCK分别为3.54±0.90 vs 2.75±0.78,2.63±0.67(P<0.05).结论 抵抗素可能通过抑制肝脏AMPK活性,增加肝糖异生关键酶的表达而影响机体肝糖代谢,降低肝糖储量,参与肝脏胰岛素抵抗的形成.
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葡萄糖6磷酸酶基因热点突变检测结合1176多态位点连锁分析快速产前诊断Ia型糖原累积病
目的探讨中国人Ia型糖原累积病简便、快速、准确的产前诊断方法.方法通过限制性内切酶图谱分析了葡萄糖6磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)基因727G→T和R83H的突变,并结合1176位点单核苷酸多态性连锁分析,对3个Ia型糖原累积病家系进行了基因诊断和产前诊断.对发现的突变及1176位点多态性用DNA测序证实.结果 3个家系先证者 G6Pase基因的2个等位基因均携带727G→T突变,分别来自其父母.家系1和3胎儿为727G→T突变杂合子;家系2胎儿不携带该突变.1176位点单核苷酸多态性分析显示,3名胎儿1176位点单核苷酸多态性与3名先证者不同.DNA直接测序结果与限制性内切酶图谱分析结果相符.家系1和家系2胎儿已出生,并证实与产前诊断结果相符.结论通过限制性内切酶酶切法筛查727G→T和R83H突变结合1176位点单核苷酸多态性连锁分析可简便、快速、准确地诊断和产前诊断Ia型糖原累积病.
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二甲双胍对糖尿病非酒精性脂肪性肝病大鼠G-6-Pase表达的影响
目的 观察二甲双胍对糖尿病非酒精性脂肪性肝病大鼠G-6-Pase表达的影响.方法 SD大鼠(雄性)随机分为正常对照组(10只),肥胖组(12只),糖尿病组(l0只),二甲双胍治疗组(9只).采用RT-PCR方法测定4组大鼠肝组织中葡萄糖6磷酸酶(G-6-Pase) mRNA表达,并测定各组空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)及空腹胰岛素(Fins).结果 糖尿病组及糖尿病二甲双胍控制组大鼠肝脏G-6-Pase mRNA均较肥胖组明显增高(P＜0.05),糖尿病二甲双胍控制组G-6-Pase mRNA较糖尿病组明显降低(P＜0.05).肝HE染色糖尿病二甲双胍控制组大鼠肝脏脂肪变性程度减轻.结论 二甲双胍可改善大鼠糖尿病非酒精性脂肪性肝病的肝脏病理学损害,其机制可能与G-6-Pase下调有一定关系.
