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角质细胞生长因子-2对ALI大鼠肺组织趋化因子FKN及紧密连接蛋白claudin-5表达的影响
目的 探讨角质细胞生长因子-?2(KGF-2)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织趋化因子FKN和紧密连接蛋白claudin-5表达的影响.方法 以健康雄性SD大鼠为研究对象,按随机数字表法分为生理盐水(NS)对照组、ALI模型组和KGF-2预处理组,每组10只.经尾静脉注射0.01?mL/kg油酸建立大鼠ALI模型;NS对照组注射等量NS.KGF-2预处理组于制模前72?h经大鼠气道内滴注5?mg/kg?KGF-2 ;NS对照组及ALI模型组滴注等量NS.各组于制模后8?h取大鼠腹主动脉血,处死大鼠后对左肺支气管肺泡进行灌洗,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定血浆和BALF中蛋白水平,计算肺通透性指数(LPI).取右肺组织,用苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察其病理学改变,并计算ALI病理学评分(LIS);测定肺湿/干重(W/D)比值;采用免疫组化法及蛋白质免疫印迹试验(Western?Blot)对肺组织中FKN和claudin-5的表达进行定性、定量分析.双变量相关性采用直线或曲线拟合相关分析.结果 ALI模型组大鼠肺组织损伤严重,出现明显的病理学改变,表现为肺泡间隔增厚,炎性细胞浸润;LIS评分、肺W/D比值及LPI均较NS对照组明显升高〔LIS(分):3.56±0.28比0.62±0.36,肺W/D比值:6.37±0.29比4.39±0.33,LPI :3.46±0.69比0.98±0.17,均P＜0.01〕.与NS对照组比较,ALI模型组肺组织FKN阳性表达明显增强,表达量明显升高(FKN/GAPDH :0.97±0.18比0.62±0.04,?P＜0.01);claudin-5阳性表达明显减弱,表达量明显降低(claudin-5/GAPDH:0.56±0.11比1.06±0.13,P＜0.01);?FKN与claudin-5蛋白表达量呈显著负相关(r＝-0.817,P＝0.025).给予KGF-2预处理后,大鼠肺组织损伤程度明显减轻,病理学改变明显改善;LIS评分、肺W/D比值及LPI均较ALI模型组明显降低〔LIS(分):2.41±0.17?比3.56±0.28,肺W/D比值:5.45±0.55比6.37±0.29,LPI :2.42±0.19比3.46±0.69,均P＜0.01〕.与ALI模型组比较,KGF-2预处理组大鼠肺组织FKN阳性表达明显减弱,表达量明显下降(FKN/GAPDH :0.79±0.03比0.97±0.18,P＜0.01);?而claudin-5阳性表达明显增强,表达量明显升高(claudin-5/GAPDH :0.80±0.05比0.56±0.11,P＜0.01);FKN与claudin-5蛋白表达量仍呈显著负相关(r＝-0.847,P＝0.012).结论 KGF-2可能通过下调趋化因子FKN的表达,恢复紧密连接蛋白claudin-5的表达,从而减轻ALI?时气血屏障损伤.
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噪声对豚鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白claudin-5表达及血迷路屏障通透性的影响
目的 研究噪声对豚鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白claudin-5表达及血迷路屏障功能的影响.方法 40只豚鼠随机分为正常对照组(20只)和噪声暴露组(20只),噪声暴露组给予声强为115 dB SPL白噪声暴露,每天6小时,连续两天,对照组不予噪声暴露.于实验前及噪声暴露后次日对两组豚鼠行ABR检测,第二次ABR检测后对两组豚鼠耳蜗基底膜行鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素(Phalloidin-FITC)染色;用硝酸镧透射电镜和常规透射电镜观察两组豚鼠内耳血迷路屏障通透性和紧密连接的变化;Western blot和免疫组织化学染色观察两组豚鼠耳蜗血管纹和螺旋韧带处claudin-5的表达.结果 噪声暴露组豚鼠ABR波Ⅲ反应阈较正常对照组阈移40 dB以上,差异有统计学意义(P<0.05); 基底膜铺片FITC染色示噪声暴露组底回基底膜毛细胞大量缺失,其余部分毛细胞纤毛排列紊乱并出现融合,而对照组毛细胞排列整齐,其纤毛呈V或W型,两组间外毛细胞计数比较差异有统计学意义(P<0.05);透射电镜下,可见噪声暴露组血管内皮细胞间和边缘细胞间的紧密连接均遭到破坏,细胞间隙增大;硝酸镧透射电镜下,大量镧颗粒从血管腔内渗漏到管腔外的组织间隙,而对照组镧颗粒仅局限于血管腔内;Western blot结果示,两组耳蜗外侧壁血管纹均有claudin-5表达,但噪声暴露组的表达量明显低于正常组;免疫组织化学染色也表明,两组豚鼠耳蜗外侧壁毛细血管内皮细胞、边缘细胞等处均有claudin-5阳性表达,但噪声组表达量显著低于正常组(P<0.05).结论 噪声通过下调紧密连接蛋白claudin-5的表达,破坏细胞间紧密连接,增加豚鼠血迷路屏障的通透性,从而导致内耳微环境的破坏,是噪声性聋可能的发病机制之一.
关键词： 紧密连接蛋白claudin-5 紧密连接 噪声性聋 血管纹 血迷路屏障 -
脑出血后血红蛋白对血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及紧密连接蛋白claudin-5的影响
目的 探讨脑出血后血红蛋白对血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及紧密连接蛋白claudin-5的影响. 方法 将SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(18只)和血红蛋白组(72只),血红蛋白组再按不同取材时间点分为24 h、48 h、3d、7d4个亚组(每个时间点18只).血红蛋白组采用脑内注入血红蛋白法制作脑出血大鼠模型.免疫组化染色观察各组大鼠血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链的蛋白表达,伊文思蓝浓度测定评估血脑屏障通透性,免疫荧光染色和实时荧光定量PCR检测claudin-5蛋白和mRNA表达. 结果 免疫组化染色结果显示:正常对照组血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链表达较少,血红蛋白组血肿侧血脑屏障内皮细胞呈棕黄色及线条状表达；血红蛋白组48 h、3d时血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链平均吸光度值明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).血红蛋白组各时间点脑内伊文思蓝含量均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光染色结果显示:与正常对照组相比,血红蛋白组24h、48 h及3d时claudin-5蛋白表达断续和减少.实时荧光定量PCR结果显示:血红蛋白组24 h、48 h、3d及7d时claudin-5 mRNA表达水平明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 脑出血后血红蛋白可以导致血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ的表达增高,进而致磷酸化肌球蛋白轻链表达增加、紧密连接蛋白claudin-5表达降低,其可能是导致脑出血后血脑屏障破坏及脑水肿发生的重要机制之一.
关键词： 脑出血 血红蛋白 血脑屏障 Rho激酶Ⅱ 紧密连接蛋白claudin-5
