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黄芪注射液对脓毒症炎症反应调控作用的研究
目的 观察黄芪注射液对脂磷壁酸(LTA)和脂多糖(LPS)刺激人原代巨噬细胞炎性因子表达的影响,探讨黄芪注射液对革兰阳性(G+)菌及革兰阴性(G-)菌脓毒症炎症反应的作用机制.方法 使用Percoll密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,以免疫抗体磁珠提纯单核细胞,经12 d在重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)诱导下培养为人巨噬细胞.将培养的人巨噬细胞接种于96孔板(每组3孔)和6孔板中(每组3孔),按随机数字表法分为对照组(加入DMEM培养液,每孔L 200 μL)、LTA 1 mg/L组、LPS 0.1 mg/L组以及黄芪注射液低(0.1 mg/L)、高(0.2 mg/L)剂量组.将培养板置于培养箱中孵育24h后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组上清液中白细胞介素(IL-8、IL-10)的蛋白含量,用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测IL-8、IL-10的mRNA表达水平.结果 LTA、LPS均能明显上调巨噬细胞表达促炎因子IL-8及抗炎因子IL-10水平,培养8h和24 h,LTA组、LPS组IL-8和IL-10蛋白以及mRNA表达均较对照组明显升高,以培养24 h升高更显著[LTA刺激组:IL-8蛋白(ng/L,×103)为41.57±1.90比1.58±0.24,IL-8 mRNA(A值)为21.49±8.05比1.00±0.16;IL-10蛋白(ng/L)为5.90±3.02比2.91±1.54,IL-10 mRNA(A值)为1.35±0.34比0.95±0.14;LPS刺激组:IL-8蛋白(ng/L,×103)为345.00±22.80比5.60±0.31,IL-8 mRNA(A值)为29.84±8.93比1.00±0.16,IL-10蛋白(ng/L)为122.37±39.26比44.79±3.67,IL-10 mRNA(A值)为7.38±1.58比1.35±0.34,均P＜0.05];黄芪注射液可使LTA、LPS刺激巨噬细胞促炎因子IL-8蛋白和mRNA表达降低,抗炎因子IL-10蛋白和mRNA表达升高,以培养24 h黄芪注射液高剂量组的变化更为显著[LTA刺激组:IL-8蛋白(ng/L,×103)为22.63±1.91比41.57±1.90,IL-8 mRNA(A值)为12.10±1.93比21.49±8.05,IL-10蛋白(ng/L)为14.03±2.22比5.90±3.02,IL-10 mRNA(A值)为10.37±6.08比1.35±0.34:LPS刺激组:IL-8蛋白(ng/L,×103)为167.75±19.90比345.01±22.80,IL-8 mRNA(A值):15.61±3.63比29.84±8.93;IL-10蛋白(ng/L)为243.22±14.41比122.37±39.26,IL-10 mRNA(A值)为16.14±4.10比7.38±1.58,均P＜0.05].结论 在炎症反应过程中促炎和抗炎因子同时存在,黄芪注射液可抑制G+菌及G-菌脓毒症炎症反应中促炎因子的基因和蛋白表达水平,同时可促进抗炎因子的基因及蛋白的表达水平,进而影响脓毒症的免疫机制,以达促炎和抗炎平衡状态.
